【摘 要】
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柑橘是世界上第一大果树,品种多样,营养丰富,深受人们喜爱。但柑橘成熟期的过于集中导致其果实供应期短且供需不平衡,严重影响了其经济效益。通过研究柑橘成花的分子机制,可以调控花期进而调控果实的成熟期。FD作为调控成花过程中重要的辅助结合因子,能直接或间接的调节开花时间。通过整合不同的成花途径以确保正确的开花时间。本研究以CiFD的启动子入手开始实验,找到了上游的转录调控因子并验证了其功能,主要结果如下
【基金项目】
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国家重大研发计划（2018YFD1000104）； 国家自然科学基金（31772252和31872045）；
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柑橘是世界上第一大果树,品种多样,营养丰富,深受人们喜爱。但柑橘成熟期的过于集中导致其果实供应期短且供需不平衡,严重影响了其经济效益。通过研究柑橘成花的分子机制,可以调控花期进而调控果实的成熟期。FD作为调控成花过程中重要的辅助结合因子,能直接或间接的调节开花时间。通过整合不同的成花途径以确保正确的开花时间。本研究以CiFD的启动子入手开始实验,找到了上游的转录调控因子并验证了其功能,主要结果如下:1.在柑橘中的不同品种进行FD启动子的扩增,三种类型的FD启动子被分离。利用CiFD启动子的核心序列调取酵母单杂交文库,筛选到一个转录因子PtbHLH96对FD启动子有转录调控作用,并通过一系列酵母实验和双荧光素酶实验证实了两者之间的关系。亚细胞定位实验发现PtbHLH96定位在细胞核上,可能是一个转录因子。双荧光素酶实验证实PtbHLH96与CiFD启动子互作且能激活CiFD的转录表达。2.对枳进行干旱和ABA处理,实时定量PCR检测PtbHLH96和CiFD表达变化。结果显示干旱和ABA处理后,PtbHLH96和CiFD的表达都呈上升趋势,结果说明PtbHLH96能够响应干旱胁迫。3.在烟草中超表达PtbHLH96基因,PtbHLH96转基因超表达株系表现出早花表型。对PtbHLH96转基因超表达烟草株系进行干旱处理,表型观察发现PtbHLH96超表达株系的叶片失水更快,萎蔫程度较野生型明显。叶片相对失水率的测定结果显示超表达株系相对失水率高于野生型,与表型结果一致。通过病毒诱导的基因沉默实验将柠檬幼苗中的PtbHLH96基因沉默之后干旱处理,生理指标测定发现PtbHLH96基因沉默之后植株的抗旱能力提高。综上述实验得出结论:PtbHLH96基因能提高植株对干旱的敏感性,降低植物抗旱能力。
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