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目的：(1)本研究旨在观察单用或联合YM155和TRAIL对人膀胱癌细胞体外增殖作用的影响,评估其诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用。(2)为YM155基础上的联合用药在膀胱癌治疗中的临床应用研究提供实验依据和理论支持。 方法：分别单用不同浓度的YM155、TRAIL和5-Fu处理T-24细胞：YM155的各工作浓度分别为：1 、5、10、50、100、500、1000 nmol/L,TRAIL的各工作浓度分别为：1、3、10、30、100、300、1000ng/ml,5-Fu的各工作浓度分别为：200、400、600、800和1000umol/ml,每种浓度设置4个复孔,空白对照组加入等体积的培养液,分别作用24,48和72小时。(2)联合应用TRAIL和YM155,配制混合药液中TRAIL的浓度分别为3、10、30、100、300ng/ml,而YM155的浓度均为5nmol/L,一组将混合药液按上述方法加入培养孔,另一组相应加入等体积同浓度的TRAIL药液,每种浓度设置4个复孔,作用48小时。应用MTT法测定不同浓度的单一药物、不同浓度的联合药物以及同一浓度的同一药物作用不同时间后对T-24细胞生长的影响情况,绘制曲线,分析结果。(3)将生长状态良好的细胞经不同浓度的YM155药液( 0、10、100、1000nmol/L)处理后,用RT-PCR和Western Blot方法检测各组中的survivin mRNA和Survivin蛋白含量。(4)流式细胞仪测定YM155对膀胱癌细胞的细胞凋亡率和细胞周期,以验证其增强细胞毒性是激活细胞凋亡的特异机制。 结果：(1)单药和联合用药后检测不同浓度的不同药物对T-24细胞生长的影响情况：不同浓度YM155作用24小时后能明显抑制T-24细胞生长,50nmol/L浓度的药物即可抑制近50%细胞生长,1000nmol/L作用最强,最大抑制率可达65%；48小时后抑制率较24小时有升高：10nmol/L的药物即可抑制近45%细胞生长,500nmol/L时细胞生长抑制率可达77.12.；72小时后其抑制率进一步升高,10nmol/L时抑制率达57.84%, 最高浓度时抑制率达到85%,相同作用时间内随药物浓度不断上升,各组T-24细胞生存率呈现明显下降趋势(P<0.01)。5nmol/L、10nmol/L、50nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L5种浓度的YM155随着作用时间的延长,T-24细胞生存率也呈现出明显下降趋势(P<0.05)。七种浓度的TRAIL对T-24作用24小时和48小时后细胞的生存率改变均不明显,所有浓度中最大抑制率不过20%,72小时后也只有1、300和1000ng/ml三种浓度处理后生长抑制率达到20%以上,最大达26.12%,1ng/ml和1000ng/ml的药物随作用时间的延长细胞生存率呈现明显下降趋势,且同一作用时间内不同浓度梯度药物之间细胞的生存率没有明显的差异(P>0.05)；阳性对照组中五个浓度(200umol/ml、400 umol/ml、600 umol/ml、800 umol/ml和1000 umol/ml)的5-Fu分别对T-24细胞作用24小时后细胞的生长抑制率依次升高(P<0.05),最高达48%,48小时和72小时呈现出同样的趋势,最高抑制率分别达到31.18%和64.36%,400 umol/ml、600 umol/ml和1000umol/ml浓度组随作用时间的延长,细胞的生长抑制率有明显上升趋势(P<0.05)。(2)5nmol/L YM155分别和TRAIL(3、10、30、100、300ng/ml)联合处理48小时后细胞的生长抑制率不断升高(P<0.05),最高达76.21%,而未联合YM155时最高抑制率仅为21.02%,二者存在明显的差异(P<0.01)。(3)分别用0、10、100、1000nmol/L 4种浓度的YM155处理T24细胞48小时后用RT-PCR技术检测survivin的核酸含量结果显示：随药物浓度的升高,细胞内survivin的核酸含量不断降低(P<0.05)。分别用0、10、100、1000nmol/L 4种浓度的YM155处理T-24细胞48小时后用免疫印迹技术检测Survivin的蛋白含量结果显示随药物浓度的上升,不同细胞组中Survivin蛋白含量呈现明显下降趋势(P<0.05)。 结论：(1)YM155单独作用可以显著抑制膀胱癌细胞的生长,最佳作用浓度范围为5-100nmol/L,该杀伤作用呈浓度依赖性和时间依赖性；(2)TRAIL单独作用对T-24细胞的杀伤作用不明显,即T-24细胞对TRAIL耐药；(3)YM155可以明显增强T-24细胞对TRAIL的敏感性,联合低浓度的YM155和TRAIL时对T-24细胞的生长抑制程度明显高于单独应用相同浓度的药物；(4)YM155可能是通过抑制人膀胱癌T-24细胞内的凋亡抑制因子Survivin的核酸和蛋白表达的机制来诱导其凋亡,提高T-24细胞对其他化疗药物的敏感性。