家蚕PTTH基因转录调控及相关神经肽的发育表达

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cloudwing5237
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昆虫神经肽在调节昆虫的代谢、发育、生殖、节律、滞育、行为和认知等方面都起到重要的调节作用,对其发育表达及转录调控进行研究具有重要意义。家蚕PTTH主要是作用于前胸腺,通过调节蜕皮激素的释放调控家蚕的生长、发育、蜕皮与变态等生理过程。本论文系统地研究了家蚕PTTH基因的转录调控、发育表达及Torso基因和相关神经肽的表达模式。克隆并测定了家蚕PTTH基因启动子区域的1140bp序列,可能包含的顺式作用元件有TATA Box、pbx-1、MEF2等。构建含家蚕PTTH启动子不同区域的报告质粒并进行活性分析,家蚕PTTH启动子的核心区域-110至+33的143bp具有很强的转录活性,上游-512至-111和下游+34至+192的片段对核心启动子具有抑制作用。蜕皮激素对家蚕PTTH核心启动子的转录活性具有明显的增强作用,但保幼激素对家蚕PTTH核心启动子的活性具有抑制作用,并且增强或抑制作用呈浓度依赖型模式。肌细胞促进因子(MEF2)是调节家蚕PTTH表达的一个重要的转录因子。克隆并鉴定了家蚕一个新的MEF2突变体,命名为MEF2B, ORF为1218bp,编码405个氨基酸。与MEF2A相比,MEF2B有12bp (GCACTCACAAAG)的缺失和3处1个碱基的突变。家蚕MEF2B包括57个氨基酸的MADS-box和29个氨基酸的MEF2的结构域;下游的319个氨基酸为转录活性区。BMEF2BN末端的DNA结合活性区的蛋白质结构预测为α-β-β-α-α结构。5龄家蚕脑中MEF2的mRNA的表达随发育而变化,1天时表达量最低,第6天升高到最高,变态前又有所下降。家蚕PTTH基因及其受体Torso基因的mRNA在脑-咽下神经节复合体中大量表达。5龄幼虫的PTTH基因mRNA表达量高于预蛹期、蛹期和成虫;5龄第6天表达量最高,蛹期4-8天时持续维持较高的表达水平,化蛾前降低,成虫表达量最低。家蚕脑-咽下神经节复合体中Torso基因的mRNA在5龄幼虫和预蛹期的含量相当。5龄幼虫2天和6天分别有个表达高峰,预蛹期3天时Torso基因mRNA急剧升高,化蛹前又降低。蛹期家蚕脑-咽下神经节复合体中的Torso基因mRNA一直保持较低的表达水平。调查了18种神经肽基因在家蚕脑-咽下神经节复合体中的发育表达模式,不同神经肽基因发育表达模式明显有差别。所调查的18种神经肽基因中,在5龄前期家蚕脑-咽下神经节中高表达的基因包括DH-PBA、EH、NPL、FMRFamide等15种基因。蛹前期表达量较高的神经肽基因较少,在所调查的基因中,仅仅CCAP表达量较高。SIFamide神经肽在成虫期保持较高的表达量,其他神经肽基因表达量相对较低。
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