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目的研究miR-1-3p在人肝癌细胞和人正常肝细胞中表达的差异和miR-1-3p对肝癌细胞增殖、细胞凋亡、迁移和侵袭能力的影响,并确定miR-1-3p的功能靶基因,为肝癌的特异性分子机制、侵袭转移以及为肝癌的早期诊断和治疗靶点的发现提供理论依据。方法1构建miR-1-3p过表达载体pcDNA3/pri-miR-1-3p,合成miR-1-3p的反义寡聚核苷酸miR-1-3p inhibitor,将其与脂质体转染到人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721,实验分为转染pcDNA3/pri-miR-1-3p质粒组(miR-1-3p组)及转染其对照pcDNA3空载质粒组(pcDNA3组)、转染miR-1-3p inhibitor组和转染乱序寡聚核苷酸组NC inhibitor四组。2通过qRT-PCR检测人肝癌细胞HepG2细胞、SMMC-7721细胞、MHCC97-H细胞和人正常肝细胞LO2细胞中五种miRNA的表达和以及过表达miR-1-3p或miR-1-3p功能被沉默后肝癌细胞HepG2中miR-1-3p mRNA表达量的改变。3来自癌症基因组图谱(TCGA)的数据,用于完成差异表达分析、生存分析和相关分析。4利用CCK-8检测五种miRNA对肝癌细胞增殖能力的影响,miR-1-3p对肝癌细胞增殖能力的影响。5细胞集落形成实验观察miR-1-3p对肝癌细胞集落形成能力的影响。6通过流式细胞术技术检测miR-1-3p对肝癌细胞凋亡的影响。7通过划痕实验和Transwell实验检测miR-1-3p对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。8利用生物信息学的方法预测miR-1-3p的侯选靶基因是CAAP1,并通过荧光报告载体实验对miR-1-3p的靶基因的进行验证。9 qRT-PCR和Western blot实验检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721过表达miR-1-3p和沉默内源性miR-1-3p后细胞中靶基因CAAP1 mRNA和蛋白表达量的改变。10通过CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室实验分析了靶基因CAAP1对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并通过进行挽救实验确定CAAP1是miR-1-3p的直接功能性靶基因。结果1 qRT-PCR实验结果显示,与人正常肝细胞LO2相比miR-1-3p在人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中低表达;在肝癌细胞中转染miR-1-3p后,与转染pcDNA3组相比较,miR-1-3p组细胞中miR-1-3p mRNA表达水平升高;封闭细胞中内源性miR-1-3p的功能后,与NC inhibitor组比较,miR-1-3p inhibitor组肝癌细胞中miR-1-3p mRNA表达水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2在肝癌患者中miR-1-3p表达降低并与患者的预后相关(P<0.05)。3 CCK-8实验结果显示,miR-1-3p过表达能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05)。在肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中转染miR-1-3p后,与转染pcDNA3组相比较,miR-1-3p组细胞增殖能力下降;封闭细胞中内源性miR-1-3p的功能后,与NC inhibitor组比较,miR-1-3p inhibitor组增加细胞增殖能力,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4细胞集落形成实验结果显示,在肝癌细胞中转染miR-1-3p后,与转染pcDNA3组相比较,转染miR-1-3p的细胞集落形成能力降低;封闭细胞中内源性miR-1-3p的表达后,与NC inhibitor组比较,miR-1-3p inhibitor组细胞克隆形成能力增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5流式细胞术结果显示,在肝癌细胞中过转染miR-1-3p后,与转染pcDNA3组相比较,miR-1-3p诱导细胞凋亡;封闭细胞中内源性miR-1-3p的功能后,与NC inhibitor组比较,miR-1-3p inhibitor抑制细胞凋亡,差异均具有统计学意义(P<0.05)。6划痕实验和Transwell实验结果表明,在肝癌细胞中转染miR-1-3p后,与转染pcDNA3组相比,miR-1-3p组细胞迁移和侵袭能力明显减弱;封闭细胞中内源性miR-1-3p的功能后,与NC inhibitor组比较,miR-1-3p inhibitor组细胞迁移和侵袭能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.01)。7生物信息学方法预测结合荧光报告载体实验证明miR-1-3p靶定CAAP1mRNA的3’UTR区。8在肝癌细胞中转染miR-1-3p后,与转染pcDNA3组相比较,转染miR-1-3p的细胞中CAAP1 mRNA和蛋白的表达量显著减少;封闭细胞中内源性miR-1-3p的功能后,与NC inhibitor组比较,miR-1-3p inhibitor组细胞中CAAP1的mRNA和蛋白的表达量明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。9 CAAP1在肝癌组织中表达与miR-1-3p表达成负相关,并与患者的预后相关(P<0.01)。10功能学实验表明CAAP1促进细胞的增殖,迁移侵袭,抑制细胞凋亡,与miR-1-3p的作用相反。11挽救实验进一步确定CAAP1是miR-1-3p的功能性靶基因。结论1 miR-1-3p抑制肝癌细胞HepG2和SMMC-7721的增殖能力和集落形成能力,并且诱导细胞凋亡。2 miR-1-3p能够减弱肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的迁移和侵袭功能。3 miR-1-3p可以下调HepG2和SMMC-7721中CAAP1的mRNA和蛋白的表达,并且CAAP1促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力和抑制肝癌细胞凋亡,提示CAAP1是miR-1-3p的直接功能靶基因,miR-1-3p可能通过靶定CAAP1抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导肝癌细胞凋亡。