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辣木(Moringa oleifera Lam),又称鼓槌树(Drumstick tree),原产于印度及非洲,为辣木科(Moringaceae)辣木属(Moringa Adams)多年生速生乔木。辣木经济价值高,是一种多功能的经济树种。繁殖方式主要是种播和扦插,扦插要建立优良的采穗圃,引种初期还不具备这样的条件,因此主要选择种子繁殖。云南省主要从印度、台湾和海南引进种子,但仅仅依靠引进种子价格太高,不能满足大面积发展辣木产业的需要,开展辣木组织培养繁殖技术研究,有助于解决引种初期所面临的良种缺乏问题,更有助于以后进一步开发辣木优质种质资源。
本研究采用植物组织培养的原理与方法,探索辣木离体快繁的有效途径,以辣木种子为外植体培养无菌苗,诱导无菌苗的茎段产生不定芽,继而增殖生根,炼苗移栽。试验用方差分析法进行数据统计分析,筛选出辣木种子适宜的消毒方法,不定芽诱导,继代和生根培养基的配方及培养程序。主要研究结果如下:
1.辣木种子适宜的消毒步骤是:15%H<,2>O<,2>浸种6~8h——→清水轻轻洗干净——→0.1%HgCl<,2>(吐温1~2滴)消毒25min——→无菌水冲洗4~5次,每次5min——→剥壳接种,培养在MS+3%蔗糖+琼脂6g/L上,10d后种子萌发率可达79%。
2.诱导不定芽以MS为基本培养基,NAA、6-BA和KT三种激素,单独使用和配合使用,均能诱导不定芽产生。不定芽诱导的适宜培养基为:MS+6-BA0.8mg/L+3%蔗糖+琼脂6g/L和MS+6-BA0.1mg/L+KT0.5mg/L+3%蔗糖+琼脂6g/L,诱导率达100%,形成不定芽所需时间短,丛生芽数量多,质量高。
3.继代培养时,对大量元素和蔗糖浓度进行试验,结果以MS培养基中所含的大量元素和3%蔗糖浓度效果最好。2-3周继代一次,增殖倍数达6。细胞分裂素为6-BA0.5mg/L时,在NAA、IBA和IAA三种细胞生长素中,以NAA最为适宜,0.02mg/L就能促进无菌苗茎的伸长;诱导增殖的细胞分裂素6-BA和KT,以6-BA更好,浓度在1.0mg/L时,配合0.05mg/L细胞生长素NAA,植株生长健壮,培养15d左右,增殖系数一般可达5,若接种母体生长粗壮,增殖系数还会提高。6-BA和NAA配合使用时,6-BA0.3-0.9mg/L+NAA0.01-0.1mg/L均能达到较好的增殖效果,增殖倍数都在3倍以上。但最适宜的继代培养基配方是MS+6.BA0.6mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+琼脂6g/L,增殖倍数达5.9。
4.在生根培养阶段,本试验以1/2MS为基本培养基,附加不同浓度不同种类的激素以诱导生根,结果表明:在各种生长素不同浓度处理中,以IBA诱导的,根数量多,0.1mg/L时根的诱导率达到98%;1/2MS+IBA0.1mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L是辣木生根的最适宜的培养基,10d开始生根,平均根数在4根以上,平均根长2cm左右。生根前期温度不宜太高,否则导致辣木徒长,影响移栽成活率。 5.炼苗移栽时,辣木较适宜的炼苗天数为7d。移栽基质采用土沙混合(土:沙=1:3体积比)或营养土和珍珠岩(2:1体积比)混合,无污染且生根好的小苗,30d后成活率仍在80%以上。营养土和珍珠岩的配比,在生长后期,能为幼苗提供丰富的营养元素,使移栽苗生长健壮。