选题依据:中药材的质量优劣与其体内的活性成分含量高低密切相关,而基原植物中次生代谢产物的积累程度及含量,在种植到采收加工的过程中受多种因素的协同影响。而最直观地用以辨别药材质量优劣的便是外观性状,通过对药材的外观进行总结形成了商品规格等级,但由于基原植物的生长和饮片的炮制加工是一个复杂的多环节过程,商品规格等级与远志质量间的关联性尚不明确。同时鉴于目前关于远志药效物质基础研究薄弱,其化学成分单体难获得,难以寻找契合度较高的病理/生物模型,因此作为质控的指标性成分与药材的临床疗效间关联性较差。急需以临床疗效为导向,建立外观性状与内在化学成分结合的远志药材质量标准,用以规范药材及饮片种植、加工、流通中的各环节。鉴于此,本研究首先采用统计分析方法,结合市场调研对现行的1984版《七十六种中药材商品规格等级标准》中远志商品规格等级标准进行修订,随后分析远志药材体内化学成分变化规律。同时,采用人源疾病靶标酶PTP1B对远志不同极性部位进行活性筛选。以期为后续远志商品规格等级标准和质量标准的完善修订提供依据,从而为保证远志药材质量的均一性与临床用药的准确性奠定基础。目的:1.修订远志药材的商品规格等级标准,规范远志药材在市场中的流通;2.分析远志体内化学成分变化的规律,从而选取合理的指标对远志药材的质量进行控制,为后续远志商品规格等级标准和质量标准的完善和修订奠定基础;3.基于大量样品的含测数据,对远志药材及饮片质量标准的修订提出合理建议,以期更好地控制远志药材及饮片的质量,为远志临床用药的安全性和有效性奠定基础;4.利用人源疾病靶标酶PTP1B对远志不同极性部位进行抗2型糖尿病活性筛选,为阐明远志可能发挥抑制PTP1B活性从而起到降糖等作用的有效成分奠定基础;方法:1.对市场上收集到的不同规格等级远志药材的外观性状数据采用SPSS进行统计学分析,结合市场流通现状,修订远志药材商品规格等级标准;2.采用HPLC法(含量测定/指纹图谱)、UPLC法(多指标含测)分析不同商品规格等级远志药材、不同组织(根/筒/木心)、不同厂家的饮片(远志/制远志)进行化学差异分析,采用SPSS、SIMCA等统计学软件分析远志体内化学成分的变化规律,提出对2015版中国药典中远志药材及饮片质量标准的修订意见,并采用因子分析建立基于外观性状的远志质量评价体系;3.采用离子交换柱纯化人源疾病靶标酶PTP1B,建立PTP1B酶活抑制体系,对大孔树脂法制备得到的远志不同极性部位及总皂苷进行活性筛选;结果:1.对现行的《76种中药材商品规格等级标准》进行修订后,使此标准更切合远志药材在市场流通中的现状,对药材的流通起到规范作用;2.不同产地的远志药材远志酮III的含量波动较大,但与规格等级关联不紧密。3,6’-二芥子酰基蔗糖可作为划分远志筒和根的指标性成分,但在不同等级间无显著差异。细叶远志皂苷的含量在各批次远志药材中相较其他两个成分稳定。不同产地、不同规格等级间远志药材的化学组成具有较高的相似度。在大筒药材中直径对于指纹图谱相似度的影响较大,在中筒药材中抽心率对于指纹图谱相似度的影响较大,指纹图谱难以区分不同规格等级的远志药材。同产地的远志药材中8个指标除3,6’-二芥子酰基蔗糖外,其余成分含量差异较大,且野生品的含量高于栽培品。3.远志木心中的组成与远志根、筒相似,但整体含量远低于根和筒。一批药材抽心前后的根与筒的指纹图谱相似度较高,指纹图谱无法区分远志药材是否抽心。3,6’-二芥子酰基蔗糖可作为区分远志药材是否抽心的指标。采用8个指标成分进行主成分分析后发现远志筒与根可得到明显区分。单一成分在根筒间不具有显著性差异。4.同一批远志饮片经过炮制后,药典3个指标的含量无显著差异。不同厂家远志饮片的质量均一性较差,各成分波动范围较广。同一批药材炮制前后的指纹图谱相似度较高,指纹图谱无法区分远志药材是否经过炮制。产地对于远志饮片化学成分的影响要大于炮制。Sibiricose A5、Sibiricose A6、Sibiricoxanthone B、Tenuifoliside A经过炮制后,含量整体略有提高,但8个成分的含量在远志和制远志之间差异不显著。5.经过相关分析后,药典指标3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量与直径、长度呈极显著相关,与抽心率呈显著相关,细叶远志皂苷的含量与直径呈显著相关,远志酮III的含量与直径、长度、抽心率均未呈显著性相关。直径与两个酮类成分(Sibiricoxanthone B、PXIII)均呈显著负相关,与糖酯类成分Glomeratose A、Tenuifoliside A呈显著性负相关,而与DISS呈现极显著正相关;长度与糖酯类成分Sibiricose A5、A6、DISS呈极显著正相关;抽心率与酮类成分Sibiricoxanthone B呈显著负相关,与糖酯类成分Glomeratose A、Tenuifoliside A呈显著性负相关,与3,6’-二芥子酰基蔗糖呈显著正相关。6.采用人源疾病靶标酶PTP1B对远志不同极性部位进行活性筛选,发现系统溶剂萃取法得到的氯仿部位对PTP1B均具有较好的抑制活性,提示此部位可能具有潜在的抗2型糖尿病的活性。7.大孔树脂法成功将远志UPLC指纹图谱中糖酯混合区沿18 min分为两部分,指认结果显示20%乙醇流分中成分大部分为糖酯类成分,少部分酮类成分;35%乙醇流分中成分大部分为糖酯类成分,少部分为皂苷类成分,两个部位间存在少量成分交叉情况。结论:本研究依据对市场和产地的实地调研结果结合SPSS统计学分析手段对现行的远志药材商品规格等级进行修订,并采用HPLC法(含量测定/指纹图谱)、UPLC法(多指标含测)对不同规格等级远志药材、远志不同组织(根/筒/木心)、远志饮片(生品/炮制品)的化学差异进行分提出对2015版中国药典中远志药材及饮片质量标准的修订意见,并建立基于外观性状的远志质量标准评价体系。通过体外PTP1B酶活抑制筛选模型筛选到远志氯仿部位可能具有潜在的抗2型糖尿病的活性。一方面为筛选远志中抑制PTP1B的有效成分奠定基础,另一方面为后续远志药材的商品规格等级标准与质量标准的修订提供依据,从而保证远志药材的质量一致性与临床用药的有效性。