灵芝被誉为传统中医药宝库中的“仙草”,具有重要的药用研究价值。灵芝孢子油是灵芝系列主要产品之一,集中了灵芝孢子原生质中的灵芝三萜、不饱和脂肪酸、有机锗和灵芝甾醇等多种有效活性成分,在免疫调节方面作用显著。一方面,含量丰富的灵芝三萜类化合物是灵芝孢子油发挥疗效的主要原因之一。因此,本研究通过大量的文献调研,汇总了目前已知的83个灵芝三萜化合物,并提供了该83个化合物的具体结构信息,进一步分析总结了现处于不同研究阶段的7种代表性灵芝酸(灵芝酸A,C2,D,F,DM,X和Y)的相关药效机制和靶向信号蛋白。其中,首次总结了灵芝酸DM诱导的自噬与细胞凋亡之间的具体串扰关系,为灵芝三萜单体在疾病预防和治疗中的研究提供参考。另一方面,灵芝孢子油易受到空气中的氧气、光照、酶和金属离子等作用而发生氧化酸败,使得储存时限和功效极大降低。灵芝孢子油珍贵难得,为提高其稳定性,本课题以灵芝孢子油为研究对象进行了以下四方面的实验研究:1.灵芝孢子油的提取及其质量评价。本课题通过单因素实验和响应面法对其提取工艺进行优化,得到最佳提取工艺,即以石油醚为提取溶剂,料液比为9/50(g:mL),提取时间为2.5小时,提取温度为46℃;以熊果酸为对照品,紫外-可见分光光度法测定提取所得灵芝孢子油的总三萜平均含量为1.02 μg/mg。质量评价结果显示灵芝孢子油的酸价为1.71 mg/g,电导率为10.24μS/cm,参考《GB2716-2005食用油卫生标准》中规定食用油的酸价≤4 mg/g,电导率低于18 μS/cm,即可判定为合格,因此,提取所得灵芝孢子油符合国家相关质量标准规定。进一步利用GC/MS分析方法对灵芝孢子油中5种脂肪酸含量进行测定,结果显示含量最高的是不饱和脂肪酸油酸(56.22%),HPLC法测得灵芝孢子油中麦角甾醇的平均含量为0.148 mg/g。进一步地利用DPPH法对灵芝孢子油自身的抗氧化性进行预评判,与其他7种常用食用油(山茶油、芝麻油、橄榄油、大豆油、玉米油、花生油和菜籽油)的抗氧化性相比,实验结果表明灵芝孢子油的抗氧化性有进一步提升的空间。2.新型油脂抗氧化剂羟基酪醇硫代二丙酸酯的合成。以羟基酪醇和硫代二丙酸为原料,通过酯化反应得到目标化合物。利用单因素实验对合成工艺进行优化,确定最终反应路线,即羟基酪醇和硫代二丙酸的投料比为2.3:1,乙腈为反应溶剂,EDC作为催化剂,在氮气保护下超声进行。进一步通过1H-NMR和13C-NMR对羟基酪醇硫代二丙酸酯进行结构确证。DPPH自由基清除实验结果表明,与单一的羟基酪醇、硫代二丙酸、羟基酪醇与硫代二丙酸的混合液(2:1)相比,同等浓度下羟基酪醇硫代二丙酸酯对DPPH自由基的清除能力明显更高。3.灵芝孢子油的稳定性提升研究。将羟基酪醇硫代二丙酸酯应用于灵芝孢子油,并对加入抗氧化剂的灵芝孢子油的稳定性进行评价。ABTS自由基清除实验表明,当羟基酪醇硫代二丙酸酯初始添加浓度≥0.4 mg/mL时,灵芝孢子油对ABTS自由基的清除率最大。以TBHQ为对照品,进一步对加入抗氧化剂的灵芝孢子油进行加速稳定性和长期稳定性实验(样品在常温光照、常温避光、60℃光照和60℃避光条件下储藏30天),加速稳定性实验结果显示,羟基酪醇硫代二丙酸酯的加入使得灵芝孢子油的氧化稳定性指数(OSI)值从自身的1.63h升至7.1 h,稳定性显著提高。长期稳定性实验结果表明,一方面,羟基酪醇硫代二丙酸酯的添加降低了所有储存条件下灵芝孢子油的PV值,并且其作用在前15天内基本保持稳定;另一方面,研究发现在60℃的温度下,羟基酪醇硫代二丙酸酯的加入使得灵芝孢子油的AV值始终低于不含抗氧化剂的灵芝孢子油,并且稳定性优于TBHQ组。4.灵芝孢子油软胶囊车间的工艺设计。以灵芝孢子油软胶囊的生产工艺路线为核心,通过对超临界CO2萃取、化胶、压丸、洗丸和干燥等生产工段进行物料衡算,确定相关生产设备的选型。根据前期计算数据和市场调研对灵芝孢子油软胶囊制剂车间进行布置和设计,并绘制了初步的工程图纸。