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目的：将尿酸氧化酶基因克隆到乳酸杆菌中，使之能产生尿酸氧化酶，为一菌多基因克隆打下基础。方法：从产朊假丝酵母菌中提取基因组DNA，根据genbank上已知的该菌尿酸氧化酶基因序列，设计引物PCR扩增尿酸氧化酶基因片段，将其克隆入质粒pMG36e，构建成重组质粒PMG36e-U，并转化大肠杆菌DH5α，筛选鉴定，提取重组质粒PMG36e-U，把重组质粒电穿孔转化保加利亚乳酸杆菌，SDS-PAGE鉴定基因工程菌体裂解液中的尿酸氧化酶，并测定尿酸氧化酶的活性。结果：1．从产朊假丝酵母基因组中扩增到的尿酸氧化酶基因片段长度为0.9kb。2．构建的含重组质粒pMD18-T-U的大肠杆菌，用XhaⅠ和HindⅢ双酶切及菌落PCR鉴定，并测序鉴定，基因片段序列与genebank上尿酸氧化酶基因序列完全一致。3．用含2.5μg／mL的红霉素MRS培养基筛选到用重组质粒pMG36e-U成功转化的重组保加利亚乳酸杆菌。4．重组保加利亚乳酸杆菌经不连续SDS-PAGE分析，表达重组蛋白的分子量约为34KD，与从尿酸氧化酶基因序列推测的303个氨基酸的理论分子量相符。5．在体外测定用DEAE DE52纤维柱纯化后的重组保加利亚乳酸杆菌酶液，酶活性可达0.39u／mL，较原始菌株稍低。结论：尿酸氧化酶基因克隆入保加利亚乳酸杆菌中，并具有酶分解能力。目的：将肌酐水解酶基因克隆到保加利亚乳酸杆菌中，使之能产生肌酐水解酶，为一菌多基因克隆打下基础。方法：从恶臭假单胞菌中提取基因组DNA，根据genbank上已知的恶臭假单胞菌肌酐水解酶基因序列，设计引物PCR扩增肌酐水解酶基因片段，将其克隆入质粒pMG36e，构建成重组质粒PMG36e-C，并转化大肠杆菌DH5a，筛选鉴定，提取重组质粒PMG36e-C，把重组质粒电穿孔转化保加利亚乳酸杆菌，SDS-PAGE鉴定基因工程菌体裂解液中的肌酐水解酶，并测定肌酐水解酶的活性。结果：1．从恶臭假单胞菌基因组中扩增到的肌酐水解酶基因片段在小为0.78kb。2．构建的含重组质粒pMD18-T-C的大肠杆菌，用XhaⅠ和HindⅢ双酶切及菌落PCR鉴定，并测序鉴定，基因片段序列与genebank上肌酐水解酶基因序列完全一致。3．用含2.5μg／mL的红霉素MRS培养基筛选到重组质粒pMG36e-C成功转化的重组保加利亚乳酸杆菌。4．重组保加利亚乳酸杆菌经不连续SDS-PAGE分析，表达重组蛋白的分子量约为28KD，与从肌酐水解酶基因序列推测的260个氨基酸的理论分子量相符。5．在体外测定用DEAE DE52纤维柱纯化后的重组保加利亚乳酸杆菌酶液，酶活性可达0.19 u／mL，较原始菌株稍低。结论：肌酐水解酶基因克隆入保加利亚乳酸杆菌中，并具有酶分解能力。