【摘 要】
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艾滋病自80年代初在美国首次报道以来,以惊人的速度在全球蔓延,给人类社会造成了极大损失,对其进行预防和治疗已经成为刻不容缓的社会问题。目前广泛采用的高效抗逆转录病毒疗法
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艾滋病自80年代初在美国首次报道以来,以惊人的速度在全球蔓延,给人类社会造成了极大损失,对其进行预防和治疗已经成为刻不容缓的社会问题。目前广泛采用的高效抗逆转录病毒疗法,虽能够显著提高HIV-1感染者生活质量,但存在着价格昂贵,耐药和副作用的问题经常会导致治疗的中断。要获得长期持续的抗病毒治疗效果还有待于研发新的抗病毒药物和治疗方法。近年来随着分子生物学技术、干细胞研究、纳米技术等相关技术的发展,关于抗HIV-1基因治疗方法的研究受到了广泛关注,成为未来艾滋病治疗研究的一个主要方向与技术手段。HIV-1病毒感染因子(viral infectivity factor, Vif)可显著增加病毒的感染力,在HIV-1感染和疾病进程中扮演着重要角色。本课题选择HIV-1vif基因作为靶点,采用RNA干扰技术抑制其表达,进而实现对HIV-1病毒感染的抑制作用。实验中针对HIV-1vif基因的不同位点构建了7条shRNA的表达载体,与vif基因的表达载体共转染于293FT细胞,Western Blot和Real-timePCR研究表明shRNA7和shRNA10对HIV-1vif基因的表达有干扰作用。将shRNA7或shRNA10表达质粒、APOBEC3G表达质粒和病毒包装质粒共同转染到产毒细胞293FT中,p24定量结果表明shRNA对假病毒的包装没有影响。假病毒感染实验表明,当shRNA7的转染量为0.5g时,shRNA7对假病毒产生蓝斑的抑制率可达到52.93%,而当shRNA7的转染量增大到1.5g时对假病毒的抑制能力升高,可达到89.45%。shRNA10的抗HIV-1活性次之,1.5g时对HIV-1的抑制率为48.95%。
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