茵陈的质量控制方法研究

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茵陈(Herba Artemisia capillaries)为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst.Et Kit.或茵陈蒿Artemisia capillaries Thunb.的干燥地上部分,作为常用中药收载于《中国药典》2005年版一部中。现行茵陈药材的质量标准还不够完善,仍是以传统的性状鉴别和显微鉴别确定真伪,以理化鉴别(化学反应和薄层色谱)评价优劣。前者属于定性分析而且需要鉴定者具有丰富的实践经验,常有人为因素参与;后者只考虑众多复杂成分中的个别“活性成分”,而忽略了中药诸多成分间的协同作用,己不能满足中药现代质量控制的要求。本研究建立了茵陈药材中有关化学成分的HPLC同时含量测定方法,同时建立了HPLC色谱指纹图谱和GC色谱指纹图谱,系统地对茵陈药材的质量控制方法进行了研究。1、本研究建立了双波长同时测定茵陈药材中绿原酸、咖啡酸和对羟基苯乙酮含量的反相高效液相色谱法。采用Luna C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%磷酸水溶液(9:91),检测波长:325nm(绿原酸、咖啡酸);275mm(对羟基苯乙酮),其线性范围(n=5)分别为52.00~1.300×103μg·mL-1(r=0.9999),1.600~40.00μg·mL-1(r=0.9999)和0.6720~16.80μg·mL-1(r=0.9995),方法回收率(n=9)分别为98.1%、98.6%和100.8%。采用该方法,测定了11批不同产地茵陈药材中的绿原酸、咖啡酸和对羟基苯乙酮含量。该方法简便、快速、准确,重现性好,为茵陈药材的质量控制提供依据。2、本研究建立了同时测定茵陈药材中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸和异鼠李素-3-O-葡萄糖苷含量的反相高效液相色谱法。采用Luna C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.04%磷酸水溶液(17:83)为流动相进行洗脱,检测波长345nm,其线性范围(n=5)分别为0.960~19.20μg·mL-1(r=0.9995)、1.200~24.00μg·mL-1(r=0.9995)、1.200~22.40μg·mL-1(r=0.9994)、56.00~1.120×103μg·mL-1(r=0.9990)、0.6400~12.80μg·mL-1(r=0.9998),方法回收率(n=9)分别为98.1%、100.7%、98.4%、100.2%和101.7%。利用该色谱条件,测定了11批不同产地茵陈药材中的五种成分含量。该方法简便、快速、准确,重现性好,为茵陈药材的质量控制提供依据。3、本研究建立了茵陈药材的高效液相色谱指纹图谱。采用Luna C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈和0.04%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,在12min内,乙腈从10%线性升至12%,从12到17min,乙腈线性升至16%,从17到40min乙腈线性升至25%,从40到90min乙腈线性升至90%。检测波长325nm。利用该色谱条件,对15批茵陈药材进行了分析。采用离差平方和(Ward’s method)和欧氏距离(Euclidean distance)作为样品测度,对药材色谱指纹图谱所得数据进行聚类分析。分析结果将15批药材分成2类,其中一类为推荐品。依据11个产地的推荐品药材图谱建立共有模式,并计算各产地样品的相似度。高效液相色谱指纹图谱的建立为茵陈药材的质量评价提供了可靠依据。4、本研究建立了茵陈药材的气相色谱指纹图谱。采用PEG-200毛细管气相色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm),使用程序升温,在22min内,温度从50℃以5℃·min-1的速率线性升至160℃,再以3℃·min-1的速率线性升至235℃,并在235℃维持15min。检测器为氢火焰离子化检测器,检测温度为230℃。利用该色谱条件,对15批茵陈的挥发油样品进行了分析。采用离差平方和(Ward’s method)和欧氏距离(Euclidean distance)作为样品测度,对药材色谱指纹图谱所得数据进行聚类分析。分析结果将15批药材分成2类,其中一类为推荐品。依据8个产地的推荐品药材图谱建立共有模式,并计算各产地样品的相似度。气相色谱指纹图谱的建立为茵陈药材的质量评价提供了依据。
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