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一、研究背景心力衰竭是很多心血管疾病的最终转归,随着全球中老年人口比例的增高和医疗事业的发展,心力衰竭的患病率也随之逐步上升,这种情况不仅存在于发达国家,发展中国家也面临此问题。在心力衰竭患者中一半以上为舒张性心力衰竭(diastolic heart failure,DHF),且患病率还在以每年1%的速度递增。DHF的预后与收缩性心力衰竭(Systolic heart failure,SHF)没有明显的不同,但目前还没有明确有效的治疗方法和药物,主要采用的是经验性和对症性治疗。因此,找寻针对DHF有效的治疗方法和药物是临床上需要攻克的重点和难点,也有着重大的科学意义和实用价值。很多研究表明DHF时钙的转运和调节存在异常。钙在心肌收缩和舒张过程中细胞中是循环流动的,包括钙摄入和钙释放和钙储存三个部分,钙的正常转运对维持心脏的生理功能具有重要作用,因此如果其中任何一个环节出现异常转运,心肌细胞就会遭到破坏,心肌的舒缩功能也会受到影响。同时,心肌舒张过程中的钙转运,如肌浆网对Ca2+的摄取、受磷蛋白磷酸化等都需要消耗能量。中医认为,“气”的概念与现代生物学中的“能量”在理论上有一定的相通性,心肌能量代谢紊乱导致能量生成障碍很可能是气虚证的本质之一。另有研究表明,益气及活血药物对心肌舒缩功能的改善可能与调节和维持心肌细胞正常的钙转运有关。因此,本课题在前期研究基础及长期临床总结的基础上,创新性提出运用益气活血法及其代表方剂——补阳还五汤治疗DHF的假说,并认为Ca2+转运调节蛋白有可能是其潜在的药物作用靶点。二、研究目的运用补阳还五汤对DHF模型大鼠进行干预,观察补阳还五汤对DHF大鼠左心室舒张功能的影响,检测钙转运蛋白的表达量和其mRNA的表达水平,初步探寻补阳还五汤治疗DHF的药物干预靶点。三、研究方法运用随机抽样的方法,将大鼠分为假手术组与造模组,其中假手术组15只,造模组45只,造模组用腹主动脉缩窄法建立DHF大鼠模型,手术后10周后将经超声心动图检测诊断为DHF的大鼠分为造模组(n=11)、西药组(n=11)和中药组(n=11)。给药干预8周,其中中药组:补阳还五汤12.72g/(kg.d)灌胃,西药组:酒石酸美托洛尔0.0045g/(kg·d)灌胃,假手术组、造模组给予等量的去离子水灌胃,各组均每日灌胃1次。药物干预结束后,运用超声心动图测量大鼠左房室瓣口舒张早期E波的峰值流速(E)、舒张晚期A波的峰值流速(A),并计算E/A比值;二尖瓣环舒张早期运动速度(e’)、二尖瓣环舒张晚期运动速度(a’),并计算e’/a’、E/e’比值;运用蛋白免疫印迹法(Wstern blot)技术检测肌浆网上的钙泵(SERCA2a)和受磷蛋白(phospholamban,PLB)的蛋白表达;运用聚合酶链式反应法(PCR)检测SERCA2a、PLB、兰碱尼受体(Ryanodine receptor2,RyR2)和 L 型钙通道的 mRNA 转录。四、研究结果1、超声心动图检测结果:与假手术组大鼠相比,造模组大鼠的E/A、e’/a’值降低(p<0.05),E/e’升高(p<0.05)。中药组e’/a’高于造模组(p<0.05),中药组与西药组检测结果无统计学差异。2、Western blot检测结果:造模组大鼠心肌中SERCA2a与PLB的蛋白表达量与假手术组相比均有下降(p<0.05),而西药组和中药组大鼠心肌中SERCA2a与PLB的蛋白表达量较造模组则升高(p<0.05),且中药组和西药组在这两个蛋白的表达上无统计学差异(p>0.05)。3、PCR检测结果:L型钙通道各组mRNA转录均没有差异(p>0.05);RyR2的mRNA中药组与造模组相比的转录和假手术组相比有所降低(p<0.05),而西药组RyR2的mRNA转录与假手术组没有明显差异(p>0.05),西药组和中药组的转录量与造模组均没有明显差异(p>0.05);SERCA2a和PLB的mRNA转录造模组、中药组、西药组与假手术组相比均有降低(p<0.05),治疗组中的西药组、中药组与造模组相比SERCA2a和PLB的mRNA转录量升高(p<0.05),以上结果中药组与西药组无显著性差异(p>0.05)。五、结论1、DHF大鼠SERCA2a和PLB钙转运蛋白表达和mRNA的表达水平下降。2、益气活血法的代表方——补阳还五汤可以在一定程度上改善DHF大鼠左室舒张功能。3、补阳还五汤可能是通过提高SERCA2a和PLB的蛋白表达和mRNA转录来调节DHF大鼠左室的舒张功能的。