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莪术为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或温郁金Curcuma wengyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。莪术味辛、苦,性温,归肝、脾经,具有行气破血、消积止痛之功效,研究表明莪术具有较好的抗肝纤维化、保肝、抗肿瘤、抗血栓等药理作用。临床主要用于治疗肝硬化、肝炎、肝癌等疾病。莪术生品行气消积力强,经醋制后主入肝经,活血化瘀作用增强。莪术中的主要活性成分为倍半萜类和姜黄素类成分,药典在莪术药材及饮片含量测定项下规定:药材中挥发油含量不得少于1.5%(ml/g),饮片中挥发油含量不得少于1.0%(ml/g),并未对指标性活性成分进行定量分析,且仅收载了生饮片和醋煮饮片,并未收载临床常用的醋炙饮片。《中国药典》2010年版为代表的质量标准已经确立了“从单指标向多指标、从指标性成分向药效成分控制”的发展方向。针对上述问题,本课题以莪术生饮片、醋炙饮片和醋煮饮片为研究对象,采用“一测多评”、指纹图谱等方法和技术,对莪术醋制前后倍半萜类及姜黄素类成分进行系统研究,并进行质量评价的方法学研究,以制定莪术饮片更加完善的质量评价方法体系。莪术饮片“一测多评”法研究:建立了 HPLC-DAD双波长同时测定莪术生饮片、醋炙饮片和醋煮饮片中的5个倍半萜类和3个姜黄素类活性成分的方法,色谱条件为 Hanbon ODS-2 C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为 0.05%甲酸乙腈(A)-0.05%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速1.0 ml/min;柱温30℃,检测波长216 nm和430 nm,进样量20μl。在上述色谱条件下测得莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素分别在各自的线性范围内线性关系良好。精密度RSD<2.66%,稳定性RSD<2.76%,重复性 RSD<2.64%,平均回收率分别为 101.84%、98.67%、100.47%、101.32%、100.12%、97.59%、103.73%和 102.64%,RSD 值均小于 2.75%,说明该方法准确、灵敏。以对照品易得,性质稳定的吉马酮为内参物,根据相对校正因子计算公式计算出莪术二酮、莪术醇、呋喃二烯、β-榄香烯、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的RCF,并比较了不同仪器、不同色谱柱上RCF的耐用性,结果不同仪器、不同色谱柱上RCF的RSD值小于2.47%。表明RCF具有良好的耐用性。采用相对偏差法、Pearson系数法、相关系数法和夹角余弦值法对外标法所得的实测值与一测多评法所得的计算值进行比较,结果:实测值与计算值的相对偏差小于3.0%,Pearson系数、相关系数和夹角余弦值均大于0.995,表明二者无显著性差异,说明所建立的“一测多评”法稳定可行,可用于生莪术、醋炙莪术和醋煮莪术饮片中的5个倍半萜类和3个姜黄素类成分的含量测定。莪术饮片指纹图谱研究:收集制备了不同品种、不同炮制方法的莪术饮片,对供试品溶液的制备方法(包括提取溶剂、提取方法、提取时间)、色谱条件(流动相、色谱柱、洗脱梯度、柱温、检测波长)进行了考察和优化,建立了不同品种、不同炮制方法莪术饮片的HPLC指纹图谱。采用国家药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件进行相似度评价,结果所建立的不同品种、不同炮制方法莪术饮片各自的指纹图谱相似度均大于0.9,符合指纹图谱的要求。对不同品种、不同炮制方法莪术饮片的指纹图谱进行聚类分析,结果同一品种、相同炮制方法的莪术饮片相似度较高,可以归为一类,不同品种、不同炮制方法的莪术饮片指纹图谱差异较大,不能归为一类。因此,莪术饮片HPLC指纹图谱可作为不同品种、不同炮制方法莪术饮片专属性的质量评价方法,为莪术饮片质量标准的制定提供了参考和科学依据。莪术饮片质量标准研究:根据《中国药典》2010年版的相关规定,对不同品种、不同炮制方法的莪术饮片进行了性状、鉴别、检查、浸出物和含量测定研究,结果表明:现行药典标准对莪术饮片的性状、显微鉴别、浸出物和检查项的相关规定可行,但薄层鉴别和含量测定项须改进和完善。本课题在前期研究工作基础上,新增了莪术醋炙饮片品种,增加了对莪术饮片中4个倍半萜类成分的薄层鉴别,采用“一测多评”法,选取不同产地、不同品种、不同炮制方法的莪术饮片所共有的含量相对较高且性质稳定的3个倍半萜类活性成分(即莪术二酮、莪术醇、吉马酮)作为质量控制的指标性成分,建立莪术饮片多成分含量测定方法,制定相应的质量标准,以进一步完善莪术的质量控制体系。综上所述,本论文通过对不同品种、不同炮制方法的莪术饮片进行“一测多评”法研究和指纹图谱研究,结合性状、鉴别、检查和浸出物测定,制定了莪术生饮片、醋炙饮片和醋煮饮片各自专属性的质量评价方法,为莪术饮片的质量监控提供了科学的理论依据。