小麦黄花叶病毒P3蛋白与TaDnaJ互作及TaDnaJ家族分析

来源 :宁波大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaobaodong2006
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小麦黄花叶病毒(Wheat Yellow Mosaic Virus,WYMV)是马铃薯Y病毒科中大麦黄花叶病毒属的成员,其会导致小麦黄花叶病毒病,使得农作物大量减产,造成巨大经济损失。本研究以WYMV P3为探究目标,捕获与其相互作用的寄主靶标蛋白。随后为探究WYMV P3侵染植株过程中发挥的作用进行了一系列分子实验。主要研究结果如下:首先,通过酵母双杂交系统以WYMV P3蛋白为诱饵对c DNA文库进行筛选,得到14个可能与其互作的蛋白,考虑到Dna J8被重复筛选的次数较多,故挑选其进行后续实验。随后,经由酵母双杂交和GST pull-down分别验证了P3和Ta Dna J8在植物体外的互作关系。其次,利用生物信息学对Ta Dna J基因家族进行了保守结构域、基因结构和蛋白质基序、染色体定位和共线性蛋白结构以及顺式作用元件范围内的全基因组分析,检测了Ta Dna J在激素胁迫下的表达谱以及不同组织中的特异性表达,证实了Ta Dna J对激素敏感,并且存在组织特异性表达。最后,通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分析了WYMV侵染后Ta Dna J的基因表达水平的变化,在随机挑选的17个Ta Dna J中有16基因表达水平上调。预测了这17个Ta Dna J与WYMV蛋白之间存在相互作用后,我们选取了一个在病毒侵染后基因表达水平最高的Ta Dna J8来进行反向筛选WYMV蛋白库,结果表明Ta Dna J8与7个WYMV蛋白在酵母系统中存在互作。然后,利用BSMV介导的基因沉默技术在小麦中对Ta Dna J8进行瞬时沉默分析,通过qRT-PCR筛选沉默显著的小麦植株并接种WYMV,结果表明系统沉默后会减弱WYMV的症状。Dna J已在许多物种中广泛研究,例如人类,果蝇,蘑菇,西红柿和拟南芥等,但Ta Dna J与植物病毒之间的相互作用机制却鲜少有人研究。本研究中,我们探究了小麦黄花叶病毒P3蛋白与Ta Dna J互作及致病机制研究,为Ta Dna J家族与植物防御机制之间的研究提供了初步的基础,有利于加深理解病毒致病及规避植物寄主防御的分子机制。
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