多效因子对培养葡萄细胞及其次生代谢产物的影响

来源 :西北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rilinx_2009
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白藜芦醇是一种植物抗毒素(phytoalexin),具有抗氧化、抗自由基活性、降血脂、抗肿瘤、抗诱变、抗衰老等作用。本论文首次采用植物组织培养和细胞悬浮培养技术筛选出一种白藜芦醇含量较高的葡萄细胞系,系统地研究了营养和环境因子对该细胞系的影响,比较了从摇床到反应器放大培养过程中细胞的生长和白藜芦醇积累情况,并就大规模生产条件下培养体系中细胞生长与接种量、溶解氧和剪切力等因子间的关系进行了探讨。以葡萄皮为外植体,在MS培养基中添加NAA 6.0mg/L+6-BA 0.6mg/L,有利于培养材料成活率的提高和愈伤组织的形成。每21天左右继代一次,愈伤组织生长良好。用继代培养7-10天的愈伤组织进行液体培养,每15天继代一次,悬浮细胞增殖迅速。葡萄细胞系Jf01在摇瓶培养和生物反应器培养中均保持了其母株生长速度快、分散性好的优点,并且白藜芦醇的合成能力也有了明显提高,是一种高产优质细胞系。Jf01细胞系在一定范围内对环境因子的变化不敏感,具有较强的耐受性。其生长的最适蔗糖浓度为30g/L;最适pH值为5.8(灭菌前):最适搅拌转速为150rpm;最适接种量为100-150g/L鲜重。细胞在增殖阶段对溶解氧具有一定的浓度要求,耗氧高峰在培养初期。搅拌转速增加时,剪切力随之增大,细胞团聚集的细胞数减少,引起细胞变形、破碎,生物量的积累受到抑制甚至下降并导致细胞溶解和白藜芦醇合成的减少。在摇瓶培养和生物反应器培养过程中,Jf01细胞系的生长状况和白藜芦醇合成均未发生显著改变,具有良好的大规模培养条件。
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