Proteomic Identification of Redox Sensitive Protei

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjfu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在环境胁迫下氧化还原代谢的失调导致细胞内活性氧(ROS)含量的增加,可能导致响应蛋白的结构和分子功能发生翻译后修饰(PTM)。氧化还原PTM是细胞信号传导和调控的重要途径,在作物的多种胁迫反应中,有多种蛋白质组学方法可以对PTM进行定量。盐胁迫通过触发多种活性氧含量的增加,从而在植物蛋白质组中产生动态变化,最终导致细胞内的氧化修饰,可以通过多种蛋白质组学方法对其进行定量。
  我们旨在通过分析甘蓝型油菜的短期盐胁迫,来鉴定大量的可逆半胱氨酸修饰生成的氧化还原蛋白质组学数据。为此,我们采用了iodoTMT方法分析了在200mM盐胁迫下持续四个小时的甘蓝型油菜幼苗的氧化还原蛋白质组。这种方法涉及iodoTMT标记半胱氨酸残基,HPLC分级分离,亲和富集和LC-MS/MS分析以及数据处理分析。使用这种方法,我们鉴定了1017种蛋白质中的2010种肽,其中909种蛋白质中的1809个位点发生氧化修饰。这些氧化修饰的蛋白质参与各种代谢,分子和细胞过程的调节。参与光合作用和氮代谢的蛋白质表达降低,而介导半胱氨酸和蛋氨酸代谢,精氨酸的生物合成,碳固定和蛋白质加工调控的蛋白质表达增加。我们定位了蛋白质中发生修饰的半胱氨酸的位置,由于半胱氨酸残基是诱导后的翻译后修饰的主要目标,所以这有助于在分子水平上阐明植物对盐胁迫的响应机制。该技术还检测到了丰度较低,酸性,碱性甚至疏水性蛋白质。我们从数据集中选择了两个发生氧化修饰的蛋白,果糖1,6双磷酸酶激酶和磷酸甘油酸激酶,并在氧化应激下检测了它们的体外活性,以验证蛋白质组学研究的结果。鉴定出的蛋白质是未来功能鉴定的潜在候选蛋白,对它们的深入研究将获得有关盐胁迫下植物响应的分子机制。
  线粒体富马酸酶(TCA周期的关键酶之一)在氧化还原蛋白质组学研究中被鉴定。因此,我们计划研究富马酸酶在植物生长,代谢和胁迫反应中的作用。我们的结果证实富马酸酶参与氧化还原调节,在过表达系中H2O2含量明显增高。甘蓝型油菜光合参数的分析表明,过表达油菜具有更高的叶绿素含量,气孔导度,二氧化碳同化量和电子传输速率,并且其光合作用得到改善。在短期和长期盐胁迫下过表达系与野生型都表现良好,并且过表达系在盐处理下的PSII量子产率和碳同化率更高,而MDA和H2O2含量低于WT。为了观察盐胁迫下相应的脂质变化,我们在对照和长期盐胁迫条件下测定了半乳糖脂(MGDG和DGDG)和磷脂(PC,PE,PG,PI,PS,PA,DAG和TAG)的生理水平。在对照条件下,未观察到MGDG,DGDG和磷脂水平发生显着变化,但是在不同盐浓度下,PC,PS,PG和PA的含量发生了显着变化,说明氧化还原调节对磷脂种类也有一定的影响。
  盆栽试验中,我们考察了对照和连续盐胁迫下油菜的生长指标。盐胁迫降低了拟南芥和油菜的开花率。过表达系中的抗氧化活性(SOD和CAT)均高于野生型,但富马酸酶在开花期活性较低。在田间条件下,由于有效分支的数量增加,非产量性角果减少,植株高度增高,过表达富马酸酶的植株比野生型开花早、具有更大的生物量,同时目标脂肪酸含量与含油量都有所提高。我们得出的结论是,线粒体富马酸酶的过表达改善了光合作用和地上部分生长,并且在调控油菜生长和盐胁迫响应中起着重要的作用。富马酸酶转基因系在正常和盐碱环境下对作物生产力的提高,对未来相关性状的油菜育种具有重要的参考价值。
其他文献
成分超标 小浣熊方便面被检出酸价超标江苏省市场监管局日前发布关于20批次食品不合格情况的通告。其中,泰州市海陵区欧买德购物中心销售的标称杭州统一企业有限公司生产的小浣熊油炸方便面(有肉任性烤味)(40克/袋,小浣熊, 2021-03-05),酸价
期刊
“双十一”交卷 还疯狂吗 相比往年,今年电商“双十一”平静了许
期刊
冰雪运动“热”起来 北京冬奥会脚步临近,引发一波冰雪运动高潮,
期刊
品牌竞逐“元宇宙” 10月31日,一个名为“柳夜熙”的抖音账号
期刊
字节跳动 告别“青春期” 這不仅仅是业务调整,还是无声的告别。
期刊
海航涅槃重生“三重门” 股权结构复杂、市场格局散乱、旗下品牌繁
期刊
哪些品牌在关店 消费市场回归热闹,“人头攒动”的购物中心又回来
期刊
棉花纤维是从棉花种皮最外层表皮元细胞发育而成的单个伸长细胞的种皮毛。类黄酮物质是自然界中常见的并发挥各种作用一类化合物,它在维持植物正常的生长发育中发挥着重要功能,类黄酮代谢对于调节各种生物学功能至关重要。在植物中,调控花中色素沉积的类黄酮生物合成途径非常保守。然而,参与生产高质量棉纤维的类黄酮黄酮生物合成途径的遗传调控的却仍不清楚。近年来,通过功能基因组学和传统育种工具,调控棉花纤维发育的分子机
学位
“英雄PK王者”谁登峰? 《英雄联盟手游》PK《王者荣耀》,腾
期刊
安踏还有多少想象力 对于崇尚“永不止步”的安踏来说,箭在弦上,而真正的挑战刚刚开始。“双十一”刚过,“安踏总成交额首超耐克”这一话题便冲上热搜。11月12日凌晨,安踏高调发布自己“双十一”的成绩单:截止11日24时,安踏集团电商累計成交额超46.
期刊