梨火疫病菌的分子生物学检测及免疫磁珠分离技术

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hjy2673237
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
梨火疫病是由Erwinia amylovora引起的极具毁灭性的细菌病害,世界上许多国家和地区(包括我国)将其列为检疫性有害生物。本论文针对进境商用苹果果实中携带梨火疫病菌Erwinia amylovora数量有限的特点,建立了准确灵敏的套式PCR的检测体系;同时以梨火疫病菌Erwinia amylovora菌体全细胞为抗原免疫小鼠,制备了梨火疫病菌的单克隆抗体,利用单抗和免疫磁珠建立了实用、简单的免疫磁珠吸附分离技术。 从源于病菌的pEA29质粒的三对引物P29A/P29B、AJ75/AJ76和PEANT1/PEANT2中筛选灵敏度比较高的引物P29A/P29B和PEANT1/PEANT2配对组合成套式PCR检测方法,其检测灵敏度可达0.15 pg菌体DNA,是常规PCR灵敏度的1000倍,比单管套式PCR的灵敏度高10倍。利用该检测方法、EPPO推荐的单管套式PCR方法以及常规PCR方法对美国、新西兰、日本和智利等国进境的166批苹果样品进行检测,三种检测方法的样品阳性率分别为53.6%,38.0%和8.4%,试验结果表明套式PCR方法可用于进境商用健康无症苹果的梨火疫病菌快速检测。 以梨火疫病菌菌株850菌体全细胞为抗原免疫小鼠,通过多轮细胞筛选,最终得到四株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,并制备了四株细胞株的腹水抗体,腹水抗体的间接ELISA效价为32000-64000。利用包被亲和基团的磁珠,通过非特异性吸附包被制备的单抗,进而特异性吸附抗原(目的菌),建立了简单、实用、有效和灵敏的梨火疫病菌分离方法。
其他文献
核酸疫苗是利用基因重组技术,将编码某种外源蛋白的目的基因注入宿主体内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答从而达到预防和治疗的目的
ZSM-5分子筛以其独特的孔道结构和强酸中心、良好的水热稳定性和离子交换性,在工业过程中得到了广泛的应用。普遍认为,在碳氢化合物的催化转化过程中,ZSM-5分子筛上的积炭是
  大豆胞囊线虫病是世界性大豆病害,其可对大豆造成严重的产量损失。培育抗性品种是防治该病害的最有效措施之一。本研究的主要目的之一是探索栽培大豆及其农家品种对胞囊线
会议
甾体皂苷是植物中普遍存在的化合物,它们具有很多重要的生理活性,如抗癌、调节免疫功能、防治心血管疾病、降血糖、抗真菌等,有些已应用于临床。变形螺甾皂苷是其中一种非常稀有
  Phytophthora root and stem rot of soybean,caused by Phytophthora sojae (P.sojae),is a destructive disease in many soybean planting regions worldwide.In a pr
会议
  土壤盐渍化和干旱严重威胁农作物的生产.增加甘薯生产将主要利用盐渍化和干旱土地.用基因工程改良甘薯的耐盐、抗旱性将是一种行之有效的方法.本研究根据我们已获得的Na+
会议
  植物受到环境胁迫时,可以迅速合成并积累不同种类的渗透调节物质来维持植物细胞内正常的生理机能,避免植物受到胁迫伤害,棉子糖系列寡糖(RFOs)即为一种小分子渗透调节物
会议
  Germin-like proteins (GLPs) are ubiquitous plant glycoproteins belonging to cupin super family that play diverse roles,including abiotic stress resistance,i
会议
在对绿色溶剂超临界CO_2的应用开发中,由于它的弱溶剂化能力,使得许多物质难以溶解于其中,极大地限制了它的使用。在众多应对方案中,通过表面活性剂乳化作用,使CO_2以液滴的形式分散于水中形成高内相CO_2/水乳液是一种行之有效的解决方法,在乳液增强驱油、多孔材料制备上都有重要的应用价值。环境友好、价格低廉的碳氢类表面活性剂鲜有上佳的乳化能力。本文设计了两种新型表面活性剂,以聚醋酸乙烯酯(PVAc)
  Drought stress is one of the major important abiotic stress factors that restrain plant growth and ecosystem production worldwide.Abscisic acid (ABA) plays
会议