桃漆酶家族基因鉴定及参与木质化的功能分析

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桃(Prunus Persica)是一种重要的经济果树。桃果实为核果,它的种子包在坚硬的木质化壳中,叫做核(stone)。漆酶(Laccase)是一种含铜糖蛋白,广泛分布于植物基因组中,参与细胞伸长过程,是木质素聚合的关键酶,在桃果实发育中,可能与桃内果皮的发育有关。目前,对桃漆酶的研究鲜有报道,在桃核果木质素聚合中起作用的分子还不清楚。主要研究结果如下:(1)在桃基因组中鉴定了48个漆酶基因(PpLACs),它们在8条染色体上分布不均匀,可分为5个系统发育簇(I-Ⅴ),其中15个预测为木质素生物合成负调控因子mi R397的潜在靶点。系统发育分析、序列分析和时空表达谱分析表明,PpLAC7、19、20、21、27、28和30可能与木质素合成和果皮硬度有关。(2)对桃子叶愈伤组织中的表达模式分析发现一个表达量很高的关键成员PpLAC21,在该基因沉默的桃愈伤组织中,木质素含量下降,推测该基因可能参与桃愈伤组织的木质素合成。经表达分析,PpLAC20和PpLAC30可能是桃木质素生物合成的重要成员。因此,这两个基因将成为后续研究的目标。(3)将PpLAC20和PpLAC30在草莓中过表达验证发现,注射区域木质素含量升高。桃MYB转录因子—Pp MYB63是At MYB63的同源基因,显示了激活PpLAC20和PpLAC30启动子的能力。(4)在拟南芥中,PpLAC20基因ATG上游2 kb启动子序列与GUS融合形成转基因植株。转基因拟南芥幼苗GUS活性的组织化学染色分析表明,GUS在角果种子、花序茎、茎叶主脉、种子外表皮等几个主要器官中均有表达,且含量较高。上述结果表明,PpLAC20和PpLAC30是桃木质素生物合成的关键基因,为后续桃木质素合成与调控研究奠定基础,可为培育优质的早熟桃品种提供理论依据。
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