雌激素对大鼠阴道组织中水通道蛋白表达的影响

来源 :四川医科大学 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tonzhofpcb
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目的:探讨去势和雌激素替代对大鼠阴道组织中的AQPs表达的影响。方法:18只8周龄雌性SD大鼠随机均分为A组(4周对照组)、B组(4周去势组)、C组(4周去势+替代组)。B组与C组以1%戊巴比妥钠40mg腹腔注射麻醉后,对照组大鼠仅切开腹壁后缝合,去势组大鼠切除双侧卵巢,去势+替代组大鼠切除双侧卵巢并于去势后每周皮下注射雌二醇(E2,250μg/kg),对照组及去势组注射等量植物油。4周后各组称体重、测定血浆雌二醇水平,腹腔注射巴比妥钠麻醉各组大鼠,阴道内置入事先称重的棉签。下腹部取正中部位切开,无菌空针抽吸净膀胱内尿液,以避免膀胱内尿液引起污染产生测量误差。于直肠两侧缓慢分离并暴露盆腔神经节,连接生理电刺激器,予以波幅0.8ms、频率16Hz、电压7V电流持续刺激大鼠盆神经节60秒,棉签留置于阴道内1min后取出,称量棉签重量。阴道分泌液量则为棉签增加部分的重量。切取全层阴道壁组织并剔除尿道及多余脂肪,倒入液氮,研磨至粉末状后倒入细胞裂解液,4℃下离心机予以12000转/分离心15分钟后,上清液即为提取的蛋白。Western-blot测定大鼠阴道组织中AQP0、AQP3、AQP5、AQP6、AQP10、AQP11、AQP12的表达量。4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定阴道组织,常规石蜡包埋、切片、脱蜡至水、滴加抗体、显色、干燥、脱水、封片。免疫组化法检测AQP0,AQP3,AQP5,AQP6,AQP11在阴道组织中的表达及定位。结果:B组血清E2(19.75±3.66 pg/m L)水平显著低于A组(35.96±2.94 pg/m L)和C组(35.58±4.40 pg/m L)(P<0.05)。使用电刺激仪刺激盆腔神经后测量阴道分泌液量,B组(2.90±0.48mg)较A组(5.94±1.60mg)和C组(6.01±1.76mg)显著降低(P<0.05)。B组阴道重量(0.18±0.01g)与A组(0.25±0.02g)和C组(0.25±0.01g)相比明显降低(P<0.05)。Western blot结果示AQP0、AQP3、AQP5、AQP6、AQP10、AQP11、AQP12在大鼠阴道组织中表达B组较A组和C组均明显降低。免疫组化结果示AQP0主要表达于阴道上皮细胞的胞质,AQP3、AQP5、AQP6主要表达于阴道上皮细胞的胞质与胞膜,AQP11主要表达于阴道上皮组织的小血管及毛细血管。结论:去势组大鼠阴道分泌液减少可能与AQP0、AQP3、AQP5、AQP6、AQP10、AQP11、AQP12的表达降低有关。雌激素可能通过下调AQP0、AQP3、AQP5、AQP6、AQP10、AQP11、AQP12的表达来调节其功能,进而影响阴道润滑功能。
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