蓝细菌能量传递模型的构建和蓝细菌光敏色素的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:numlof
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光合作用是地球上最重要的化学反应,地球上所有生命活动所需要的能量,均是由光合生物通过光合作用提供的。集胞藻,Synechocystis sp.PCC6803是研究光合作用的模式生物之一。ApcE是藻胆体连接蛋白,负责将能量从藻胆体传递到光反应中心Ⅱ,Hp49是一个人工合成蛋白,具有4个重复的α螺旋,其具有2个重复的α螺旋的结构单元Hp49(2α)同样具有生物活性,可以结合多种色素。   本论文通过大肠杆菌表达系统,构建了能量吸收传递模型PCB-ApcE(1-240/△77-153)::Hp49(2α)-ZnMP,PEB-ApcE(1-240/△77-153)::Hp49(2α)-ZnMP通过吸收与荧光光谱的测定分析,证实在PCB-ApcE(1-240/△77-153)::Hp49(2α)-ZnMP中,ZnMP-Hp49(2α)可以将其吸收的能量传递给PCB-ApcE(1-240/△77-153)。而在PEB-ApcE(1-240/△77-153)::Hp49(2α)-ZnMP中则无能量传递现象。该研究将有助于我们对光合作用能量吸收与传递的进一步理解。而且,我们还将apcE(1-240)基因与hP49基因构成的融合基因通过同源双交换的方式,替代WT6803中的cpcA::cpcB基因,构建成突变体,为后续研究做准备。   另外,通过克隆技术,从鱼腥藻Anabaena sp.PCC7120总DNA得到all4261gaF2基因并成功构建质粒pET-all4261gaF2,通过与PCB在大肠杆菌体内共表达,得到重组产物PCB-All4261GAF2。通过光谱测定与分析,证实All4261GAF2蛋白可以与PCB共价结合,其最大吸收峰位于614nm,最大荧光峰位于644nm。通过尿素变性实验,我们计算得到了PCB-All4261GAF2的摩尔消光系数,为31643 M-1 cm-1;另外我们还计算得到PCB-All4261GAF2色素蛋白的荧光量子产率,为0.115。
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