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目的:构建靶向阻断人胃癌SGC7901细胞Ⅰ型PI3K信号传导通路的shRNA结构质粒,观察其对靶基因PI3KCA mRNA表达的抑制效果,并筛选出干扰效果最佳的shRNA序列。方法:选择针对人Ⅰ型PI3K信号传导通路基因PI3KCA mRNA的特异性RNA干扰序列,构建4个在不同位点对PI3KCA mRNA进行靶向shRNA干扰的重组质粒,采用基因测序确保干扰序列已正确插入载体中;将质粒转染胃中分化腺癌SGC7901细胞,通过shRNA结构阻断Ⅰ型PI3K信号传导通路,诱导细胞发生自噬性死亡。在转染第24 h、48 h、72 h镜下观察胃癌细胞形态学变化,转染48 h后收集细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测目的基因PI3KCA、自噬相关基因MAP-LC3 mRNA的表达变化;在转染72 h后收集细胞总蛋白,采用Western Blot技术检测PI3KCA蛋白催化亚基p110蛋白的表达变化;通过上述检测结果,筛选出效果最佳的shRNA干扰序列。结果:成功构建4种具有Ⅰ型PI3K信号传导通路靶向干扰的重组质粒,基因测序证明shRNA干扰链已正确插入质粒载体中;胃癌SGC7901细胞在质粒转染24 h后镜下观察见细胞出现胞体皱缩、细胞间隙增宽,48 h后细胞出现明显皱缩,部分细胞脱落,72 h后见较多细胞脱落;48 h后行荧光实时定量PCR技术检测各组PI3KCA以及MAP-LC3 mRNA的表达情况,4组行shRNA干扰的细胞PI3KCA1和PI3KCA2 mRNA均表达下调,其中干扰质粒样品No.705的PI3KCA1 mRNA表达量下调至空白对照组的2.4%±1.3%(p<0.05),PI3KCA2 mRNA表达量下调至空白对照组的0.4%±0.4%(p<0.05),4组行shRNA干扰细胞的自噬相关基因MAP-LC3 mRNA均表达上调,其中干扰质粒样品No.705 MAP-LC3 mRNA表达量上调至空白对照组的5198.39±0.04%(p<0.05);72 h后Western Blot检测Ⅰ型PI3K蛋白催化亚基p110蛋白表达情况,4组行shRNA干扰的细胞p110蛋白表达出现不同程度下调,其中干扰质粒样品No.705 p110蛋白表达量下调至空白对照组的49.20%±14.11%(p<0.05)。结论:成功构建的靶向shRNA质粒可有效阻断Ⅰ型PI3K信号传导通路,抑制靶基因PI3KCA mRNA以及相应蛋白的表达,上调自噬相关基因MAP-LC3 mRNA的表达。基于PI3KCA的mRNA 3090-3118位点碱基设计的干扰序列“5’-AGAGGTTTCAGGAGATGTGTTACAAGGCT-3’”阻断Ⅰ型PI3K信号传导通路的效果最佳。