【摘 要】
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本文从收集到的43种霉菌、5种酵母菌中,利用简单、直观的指示剂变色圈法对菌株进行了初筛。通过观察变色圈与菌落直径之比的大小,来确定是否为产酶菌株和产酶量的高低,筛选8
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本文从收集到的43种霉菌、5种酵母菌中,利用简单、直观的指示剂变色圈法对菌株进行了初筛。通过观察变色圈与菌落直径之比的大小,来确定是否为产酶菌株和产酶量的高低,筛选8株可能产酶菌株。分别进行摇瓶发酵,以菌体作酶源水解10%DL-泛解酸内酯溶液一定时间后,用旋光仪测定反应液的旋光度。测得旋光度为正,数值越大者,水解能力越强。为了进一步鉴定产物和转化率,利用HPLC进行了分析测定,结果表明6株为产酶菌株。经过复筛,最终确定了1株酶活性较高、专一性好的菌株为出发菌株。经过初步鉴定,确认这株菌株为尖镰孢菌。再经过诱变选育,得到了突变株尖镰孢菌CZ-437。经6次传代实验,发现此菌株产酶高,稳定性好。通过对该菌株培养基营养组成和发酵条件优化,结果发现培养基的最佳碳源为:葡萄糖和甘油;最佳氮源为:蛋白胨、玉米浆和酵母浸膏。最佳无机盐为CaCO3,其添加量为5g/L。最佳发酵产酶条件为:培养基pH为7.0,装液量为50mL/250mL;接种量8%;发酵温度为28℃;摇床转速为200r/min,培养时间为72h。在此条件下,尖镰孢菌CZ-437发酵后菌体的生物量达到7.08g/L,酶活达到7.03U/L。利用在最佳发酵条件下发酵得到的尖镰孢菌CZ-437菌体,对DL-泛解酸内酯水解条件进行了优化,最佳水解条件为:底物浓度为20%;菌体添加浓度为14%;摇床转速为200r/min;温度为28℃;pH值调节控制到7.5。在最适水解条件下,底物溶液水解16h后,水解液的旋光度变化值为+3.7°,底物水解率达到30%以上。
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