脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金检测试纸条的研制

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是一种常见的霉菌毒素,世界各国普遍存在污染,在我国粮食谷物中其含量超标情况严重。现阶段DON的检测技术中TLC、ELISA、HPLC等方法虽然能定量分析,但其操作繁琐、不能实现现场快速检测,而实验研制的胶体金免疫试纸条使用更为方便,适合大批样品的快速检测。本论文对比了抗坏血酸和柠檬酸三钠两种方法制备的胶体金溶液,因抗坏血酸法制备的金颗粒不易保存、稳定性差,最终选用2 mL浓度为1%的柠檬酸三钠来还原0.01%氯金酸,制备的金颗粒粒径约为17 nm左右。通过不断优化,实验确定1 mL胶体金溶液中添加0.1 mol/L K2CO3溶液17μL,DON抗体5μg,稳定剂选择先加100μL 1%PEG,再加入10%BSA 100μL,离心纯化完后底部沉淀用PBS重悬,金标抗体用复溶液稀释5倍,检测线和质控线上分别包被0.4 mg/mL的DON-BSA和0.6 mg/mL的羊抗鼠IgG,NC膜型号为CN140,在37℃条件下干燥4小时,包被液0.01 mol/L pH7.4 PBS(5%蔗糖,5%甲醇)中加入0.085μL/μL的10%NaCl来增强显色效果。样品垫型号为GL-b03,金标垫型号为GL0194。样品垫处理液为0.01 mol/L pH7.4 PBS(5%蔗糖,1%BSA,0.1%吐温-20),金标垫处理液和金标复溶液均为0.01 mol/L pH7.4 PBS(7%蔗糖,1%BSA,0.4%PVP,1%海藻糖)。LS/T6113-2015中规定粮食中呕吐毒素胶体金快速定量检测法,其检出限为120μg/kg。本实验研制的试纸条灵敏度为40 ppb,在阴性样品牛奶和燕麦中添加标准品检测限分别为40μg/L和70μg/kg,检测饲料、黄豆、玉米皮、玉米糁、荞麦、大米等样品,阴、阳性检测结果和LC-MS/MS检测结果大致相同,则试纸条具有较高的实用价值。
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