绞股蓝总皂苷及其微生物转化产物的制备与生物活性研究

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绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum(Thunb) Makino]为葫芦科多年生落叶草质宿根藤本植物,是目前已知的除五加科植物人参属以外,唯一含有人参皂苷类成分的植物。大量研究表明,绞股蓝皂苷在抗氧化、抗炎、抗癌、改善免疫力等方面都表现出较高活性,因此绞股蓝一直都是研究开发中备受关注的药用植物。  本论文是从绞股蓝中提取绞股蓝总皂苷,通过微生物转化,切除绞股蓝皂苷侧链的糖苷,从而获得经过微生物代谢后的次级绞股蓝皂苷。并比较研究转化前后绞股蓝总皂苷的生物学效应。主要研究内容及结果如下:  比较水浴加热提取与超声提取两种方法对绞股蓝总皂苷提取效率的影响,结果表明超声法提取率高于水浴加热提取率。结合上述实验结果,正交实验优化超声法的最佳提取条件为90%乙醇,料液比为1∶20,提取时间为50min。  通过静态吸附和动态洗脱研究比较了大孔吸附树脂D101、HP-20、DM130及AB-8对绞股蓝总皂苷的富集纯化效果。结果表明DM130大孔吸附树脂对绞股蓝总皂苷的富集纯化效果最佳。以乙醇作为洗脱剂,对于动态洗脱方法最佳的乙醇体积分数为70%。  以硅胶和聚酰胺为层析柱的填料,薄层层析跟踪检测,对转化前绞股蓝总皂苷进行柱层析分离,获得50.4mg皂苷化合物GYP-C1,分子量为1093.6和18.4mg的皂苷化合物GYP-C2,分子量961.5。并通过NMR鉴定出这两种化合物的结构,发现GYP-C1可能是尚未发现的皂苷化合物。GYP-C2为2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。  以灰绿曲霉和青霉菌分别转化福建南靖绞股蓝总皂苷,HPLC检测比较转化前后的绞股蓝总皂苷成分的变化,结果表明经两种菌株分别转化后,在总皂苷中分别产生了不同于转化前的皂苷成分。  通过本实验室建立的酪氨酸酶活性测定方法测定转化前后的总皂苷对酪氨酸酶的抑制活性,结果发现转化前的绞股蓝总皂苷对酪氨酸酶具有抑制作用,使酶活力下降一半时的浓度(IC50)为0.15mg/mL。DPPH自由基清除实验、DNA氧化性损伤实验及铁离子还原力的测定表明转化前后的皂苷都具有良好的抗氧化能力。
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