【摘 要】
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[目的]:通过对孕10天的SD大鼠进行维甲酸灌胃,成功建立了新生鼠的类马蹄内翻足动物模型。并分别对对照组和实验组新生鼠后肢的形态学以及肌肉和软骨组织中的HoxA9、TBX—3、CAS
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[目的]:通过对孕10天的SD大鼠进行维甲酸灌胃,成功建立了新生鼠的类马蹄内翻足动物模型。并分别对对照组和实验组新生鼠后肢的形态学以及肌肉和软骨组织中的HoxA9、TBX—3、CASP10基因的表达进行实时免疫荧光PCR技术进行测定和比较,从而探讨先天性马蹄内翻足相关致病基因的表达与外界环境因素干预之间的关系以及维甲酸的对先天性马蹄内翻足的作用位点,为该病的病因学、流行病学及预防研究提供新的科学根据。
[方法]:(1)选取的SD大鼠交配后,分为对照组和实验组。对照组随机选取孕SD大鼠2只,于怀孕10天时以橄榄油灌胃一次。实验组选取孕SD大鼠6只,于怀孕10天时以140mg/kg的维甲酸剂量(40mg/ml溶于橄榄油中)灌胃一次。于孕16~18天待孕鼠自然分娩新生幼鼠。(2)两组所产幼鼠根据是否出现后肢畸形分为对照组、畸形组及非畸形组;并分别取后肢软骨及肌肉组织进行RNA抽提、定量。最后进行荧光实时定量 PCR 测定HoxA9、TBX—3、CASP10 基因的拷贝数。(3)统计和比较各组间待测基因拷贝数的区别并讨论其意义。
[结果]:(1)2只对照组SD孕大鼠共产仔22只,未发现畸形或死胎。6只实验组SD孕大鼠中有一只在灌胃后2天死亡,余下可利用5只孕鼠共产仔49只,其中死胎6只,无肛无尾畸形1只,后肢出现类马蹄内翻足畸形的共30只。畸形出现率为61.2%。未出现畸形的实验组新生鼠足的外观与对照组相同。(2)荧光RT-PCR结果:实验组在HoxA9及 TBX-3 基因的平均拷贝数明显低于对照组和非畸形组(P<0.001,P<0.05);而在CASP10基因的平均拷贝数则明显大于对照组和非畸形组(P<0.001)。而对照组与非畸形组在各个基因的拷贝数比较上则无明显差异(:P>0.05)。
[结论]:(1)维甲酸能成功诱导出SD大鼠新生幼鼠类马蹄内翻足畸形的模型。(2)维甲酸对于SD大鼠的 TBX-3,HoxA9,CASP10基因的表达均有影响。(3)维甲酸可能与通过影响 TBX-3,HoxA9,CASP10 基因的表达导致SD新生大鼠产生类马蹄内翻足样畸形。
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