猪链球菌2型免疫磁珠的制备及在SS2分离鉴定中的应用

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猪链球菌分35种血清型,其中猪链球菌2型(Streptococcus suis type2, SS2)流行最广,发病率最高,而且可感染人致死,是一种重要的人畜共患病病原。由SS2引起的猪链球菌病常呈散发或地方性爆发,发病率和死亡率均很高,严重危害养猪业的发展。分离鉴定病原是确诊疾病和开展病原流行病学研究的重要前提。在本病原分离方法上,主要依靠采用将病料直接接种THB培养基或使用选择性培养基提高细菌分离率。临床实践中,由于检测体系中致病菌的相对浓度有时候较低,按照普通分离细菌的方法可能无法分离到致病菌,如果可以富集体系中的目的细菌,并能够将目标细菌浓缩到一定的浓度内,将大大提高细菌的检出率,同时也便于细菌的分离培养,便于SS2进一步研究的展开。因此,探索一种敏感性更高特异性更强的分离SS2的新方法具有现实意义。也可为其它细菌的分离提供借鉴。免疫磁珠技术是近年来国内外研究的一种新的免疫学技术,免疫磁珠是免疫微球的一种,它具备了固相化试剂特有的优点以及免疫学反应高度专一性的特点,并且分离速度快、效率高和可重复性好;同时操作简单,不需要昂贵的仪器设备。所以它在免疫检测,免疫吸附,细胞分离和培养等领域中得到越来越广泛的应用。本试验利用HA9801灭活疫苗制备兔抗猪链球菌2型多克隆抗体,纯化抗体,用此抗体包被磁珠制备猪链球菌2型免疫磁珠,确定包被磁珠所需抗体的浓度和包被时间。建立了利用猪链球菌2型免疫磁珠分离鉴定SS2的操作流程,与普通分离细菌的方法相比,在分离临床病料方面,敏感性提高了100倍,特异性方面能特异性的筛选到SS2。本方法也能从人工感染的小鼠的肝脏匀浆中回收到病原。最后用本方法检测了从江苏,四川等地送检的病料,成功地分离到了1株可疑猪链球菌2型,经三重PCR鉴定为2型猪链球菌。结果表明建立的免疫磁珠技术可以用于SS2的分离鉴定。
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