目的:本实验研究通过建立大鼠子宫韧带机械性损伤模型,利用子宫内膜间充质干细胞的多向分化潜能,使损伤的韧带组织进行再生修复,检测在修复前后韧带中弹性蛋白表达的情况,初步探讨干细胞在韧带组织损伤修复过程中的部分再生或完全再生功能。方法:选择体重为300±10g的清洁级SD雌性大鼠建立第一次普通大鼠子宫韧带机械性损伤模型,分别取术后3天、6天、9天、12天、15天以及正常的大鼠子宫韧带,每组取材后将组织进行福尔马林浸泡,后石蜡包埋组织,采用苏木素染色法分析不同时间点瘢痕愈合情况,确定最佳的瘢痕修复时间点。第二次建立注射干细胞的大鼠子宫韧带机械性损伤模型,此次于损伤的韧带部位局部注射未标记的人子宫内膜间充质干细胞,分别于术后3天、6天、9天、12天取材,用小鼠抗人细胞核抗体(mAb1281)进行核标记,阳性细胞即为移植细胞,以此利用免疫荧光技术观察移植的人子宫内膜间充质干细胞在大鼠体内存活情况。通过两次造模,最终选定瘢痕修复最佳时间点。以该时间点为基础,建立瘢痕组、干细胞组以及正常对照组模型,利用苏木素染色、免疫组织化学法和westen-blot比较三组间损伤子宫韧带在瘢痕修复过程中弹性蛋白的表达情况,从而探讨干细胞在韧带组织损伤修复过程中的部分再生或完全再生功能。结果:1.苏木素染色法瘢痕修复最佳时间点的选取:术后3天、6天、9天、12天、15天、正常大鼠子宫韧带进行HE染色,结果发现,术后3天韧带组织中明显可见大量新生壁薄的毛细血管、炎细胞、成纤维细胞,胶原纤维少,随时间推移损伤组织中新生血管、炎细胞、成纤维细胞逐渐减少,网状纤维及胶原纤维逐渐增多,12天与15天组织瘢痕修复无明显差别,遂取12天为实验时间节点。2.免疫荧光染色检测人子宫内膜间充质干细胞的存活情况:用小鼠抗人核抗体(mAb1281)标记注射人子宫内膜间充质干细胞后,观察术后3天、6天、9天、12天大鼠子宫韧带中干细胞存活情况,发现12天免疫荧光反应仍呈阳性,表明此时间点间充质干细胞仍存活。3.术后12天瘢痕组、干细胞及正常对照组之间的的比较:(1)免疫组化结果显示:瘢痕组、干细胞组及正常组的OD值分别为分别为0.09±0.01、0.23±0.04、0.22±0.02;弹性蛋白在瘢痕组中的阳性表达比干细胞组低,差异具有统计学意义(P<0.05),干细胞组与正常对照组相比弹性蛋白抗体阳性表达无统计学意义(P>0.05)。(2)免疫印迹法检测结果显示:弹性蛋白在瘢痕组、干细胞组、正常对照组中的灰度值分别于β-Actin灰度值的比值为:0.17±0.01、0.34±0.12、0.32±0.10,弹性蛋白在瘢痕组中的表达比干细胞组中低,差异具有统计学意义(P<0.05),干细胞组与正常对照组相比弹性蛋白抗体阳性表达无统计学意义(P>0.05)。结论:弹性蛋白在干细胞组中的表达较瘢痕组明显增高,表明干细胞在损伤的韧带组织修复过程中发挥了其分化潜能,可向成纤维细胞分化,或通过其他途径,如外泌体、旁分泌作用等促进弹性蛋白的分泌,进一步组装成成熟的弹性纤维,使组织部分或完全再生。