IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体的制备及功能研究

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作为一类在自然界中分布广泛且具有重要作用的物质,多糖的研究已有半个多世纪的历史,但因其分子结构复杂且庞大,同时缺乏有效的研究工具,使得多糖的相关研究发展缓慢。在多糖研究中,β-葡聚糖具有很重要的生理活性,一直以来都是人们关注的热点。它是由D-吡喃葡萄糖单体组成的多聚糖,广泛表达于真菌(如白色念珠菌、酵母菌、新生隐球菌、香菇和灵芝等)和植物(如燕麦、青稞等)中。白色念珠菌表面的β-葡聚糖以β-1,3-葡聚糖为主链,β-1,6-葡聚糖为侧链,这两种连接方式的葡聚糖均可作为模式识别分子(PAMPs)被机体免疫系统所识别,诱导机体产生免疫应答。已有研究证实IgG型β-1,3-葡聚糖特异性抗体具有很好的抗真菌感染能力,但IgM型的β-1,6-葡聚糖单抗则没有作用,因此,本课题首先制备了IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体,并探讨了其在抗真菌感染过程中的作用。  我们首先将多糖与载体蛋白偶联来免疫小鼠而制备了IgG型β-1,6-葡聚糖特异性多抗,通过流式细胞术和ELISA法确定该抗体能够很好地识别白色念珠菌表面的β-1,6-葡聚糖。进而,我们通过抗血清过继转移实验进一步研究了IgG型β-1,6-葡聚糖特异性多抗在抗真菌感染中的作用。结果显示,IgG型β-1,6-葡聚糖特异性多抗在体外可以较好的抑制真菌的生长,在体内明显的减少小鼠肾脏中真菌的载量。  为进一步研究IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体的抗真菌感染作用,我们尝试制备IgG型β-1,6-葡聚糖单抗。我们通过化学方法将β-葡聚糖与载体蛋白相偶联,诱导机体产生IgG型β-1,6-葡聚糖特异性多抗,将免疫效果最好的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0在PEG1500作用下进行融合,通过杂交瘤技术筛选多糖特异性单克隆抗体,但多次融合筛选后均未得到IgG型β-1,6-葡聚糖单抗。  此外,以IgG型β-1,6-葡聚糖抗体为工具,通过流式细胞术进一步检测发现EL-4细胞表面有β-1,6-葡聚糖表位的表达,该结果提示β-1,6-葡聚糖表位不仅是一种模式识别分子(PAMPs),同时可能也是一肿瘤相关糖抗原(TACAs)。为探究IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体是否具有抗肿瘤的作用,我们用β-1,6-葡聚糖-蛋白偶联物等不同抗原免疫 C57BL/6小鼠,待小鼠体内有较高滴度的IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体后,皮下接种EL-4细胞,观察成瘤时间、测量瘤体大小并计算小鼠的生存时间。结果显示IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体可以在一定程度上减缓肿瘤的生长速度,延长小鼠的存活时间。  总之,本课题的研究结果表明,β-1,6-葡聚糖不仅作为一种模式识别分子表达于白色念珠菌表面,同时也可作为一肿瘤相关糖抗原而表达于某些肿瘤细胞的表面。IgG型β-1,6-葡聚糖特异性抗体具有抗真菌感染和抗肿瘤的作用,这可能会为真菌感染和肿瘤的诊断与治疗提供新的途径。
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