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目的:宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,是仅次于乳腺癌而引起妇女癌症相关死亡的重要疾病。尤其是年轻宫颈癌患者的发病率有逐年上升趋势。大多数学者认为:肿瘤的发生、发展、浸润、转移是一个多种因素共同参与的多步骤、多基因调控的复杂过程。其中包括多种原癌基因的协同作用,多种抑癌基因的失活和多种生长因子及其受体的调节等。本实验通过检测Survivin、PCNA(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及PTEN(phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome ten,PTEN)在宫颈病变组织中的表达,探讨Survivin、PCNA和PTEN在宫颈鳞状上皮细胞癌(ceryical squamous cell carcinoma,CSCC)和宫颈内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasia GIN)组织中的阳性表达及相关性,并对宫颈病变组织中DNA含量及细胞周期分析,进一步明确宫颈癌发生、发展与基因调控的关系,为宫颈癌的基因治疗、免疫治疗和临床预后等方面提供新的理论和实验依据。
方法:
1用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)S-P法检测92例宫颈鳞癌(CSCC)及癌旁正常宫颈组织和40例CIN组织中Survivin、PTEN和PCNA的蛋白表达情况。
2应用流式细胞术(Flow Cytometrye,FCM)的方法对92例宫颈鳞癌组织及癌旁正常宫颈鳞状上皮组织和40例CIN组织进行DNA倍体分析。
3运用统计软件SPSS11.5对数据进行统计分析。
结果
1 Survivin在宫颈不同病变组织中的表达
应用IHC法检测92例宫颈鳞癌及对应癌旁正常宫颈组织和40例CIN组织中Survivin表达,结果:宫颈鳞癌组中Survivin阳性表达率为78.19%, CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组分别为36.40%、64.38%和72.67%;正常宫颈鳞状上皮组织无Survivin阳性表达,与宫颈鳞癌组织和CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ相比差异有显著意义(P<0.01)。宫颈鳞癌组、CINⅡ、CINⅢ组Survivin的阳性表达明显高于CINⅠ组及正常宫颈组织(P<0.01);宫颈鳞癌组与CINⅡ、CINⅢ组的Survivin表达无显著性差异(P>0.05);CINⅠ与CINⅡ、CINⅢ组之间Survivin表达有显著性差异(P<0.05);Survivin的表达在各组均与年龄无关。
2 PCNA在宫颈不同病变组织中的表达
应用IHC法检测92例宫颈鳞癌及相应癌旁正常宫颈组织和40例CIN组织中PCNA表达,结果:宫颈鳞癌组织中PCNA阳性表达率为82.60%,CINⅠ、CINⅡ、CNⅢ分别为33.33%、61.42%和81.81%,癌旁正常宫颈组织PCNA无阳性表达。宫颈鳞癌组、CINⅡ、Ⅲ组中PCNA阳性表达明显高于CINⅠ(P<0.01);宫颈鳞癌组与CINⅡ、CINⅢ组的PCNA表达无显著性差异(P>0.05);CINⅠ与CINⅡ、Ⅲ组之间PCNA表达有显著性差异(P<0.05);将宫颈正常组织组、CIN(60.00%)组与宫颈癌组的PCNA表达相比较,PCNA表达逐渐增强,且三组之间差别有显著性意义(P<0.01)。
3 PTEN在宫颈不同病变组织中的表达
应用IHC法检测92例宫颈鳞癌及对应癌旁正常宫颈组织和40例CIN组织中PTEN表达,结果:宫颈鳞癌组PTEN阳性表达率为19.56%;CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组中PTEN的阳性表达率分别为66.67%、35.71%和18.18%;癌旁正常宫颈组织中PTEN的表达率为97.83%,(P<0.01);宫颈鳞癌组、CINⅡ、CINⅢ组中PTEN的阳性表达明显降低,与癌旁正常宫颈组织组、CINⅠ组相比,差异有统计学意义(P<0.01);宫颈鳞癌组与CINⅡ、CINⅢ组的PTEN表达无显著性差异(P>0.05)。CINⅠ组与CINⅡ、Ⅲ组之间相比有显著性差异(P<0.05);随着宫颈病变程度的进展PTEN的表达呈下降趋势(P<0.05)。
4 Survivin、PCNA和PTEN在宫颈不同病变组织中表达的相关性分析
Survivin、PCNA和PTEN在宫颈鳞癌组织中阳性表达率分别为:78.19%,82.60%和19.56%;在CIN组织中阳性表达率分别为57.76%、60.00%和42.50%;Survivin、PCNA在癌旁正常宫颈癌组织中无阳性表达,PTEN表达为97.83%。Survivin、PCNA与PTEN相比在不同宫颈病变组织中的阳性表达率成负相关(r1=-0.546,P<0.01)Survivin与PCNA相比成正相关(r1=0.234,P<0.01)。
5 DNA含量与细胞周期分析
应用FCM对42例宫颈鳞癌及对应癌旁正常宫颈组织和40例CIN组织细胞核进行DNA含量及细胞周期分析。3组CIN之间的DNA含量(DI)及S期比例(SPF)、增殖指数(PI)分别在二倍体及异倍体病变中依次呈增高趋势并有显著性差异(P<0.01),说明其癌变几率依次增高,且异倍体CIN、增殖活性明显高于二倍体CIN,其癌变可能性较大。宫颈鳞癌的D I、SPF、P I值明显高于CrN(P<0.01),异倍体宫颈鳞癌的增殖活性明显高于二倍体宫颈鳞癌(P<0.01),其结果均与临床病理检测相符合。
结论
1 Survivin、PCNA的表达与宫颈癌的进展、组织学分级、临床分期有关,而与年龄无关。宫颈癌临床分期越晚、细胞分化程度越低,Survivin、PCNA的表达越高。提示宫颈癌的发生、发展与细胞凋亡调节异常,细胞永生、细胞增殖活性增加有关。
2随着CIN级别的增高及宫颈鳞癌的进展,其组织中PTEN的表达呈进行性下降。提示PTEN表达降低是宫颈癌变过程中的早期事件,也是宫颈组织恶变的信号。
3在宫颈鳞癌、CIN及癌旁正常宫颈组织中Survivin、PCNA的阳性表达成正相关,Survivin、PCNA与PTEN在宫颈病变组织中的表达成负相关。
4宫颈鳞癌及CINⅡ、CINⅢ组织中DNA含量(DI)和细胞增殖指数(PI值)增高,可能是宫颈癌恶性演进过程中的重要标志。