论文部分内容阅读
目的：研究基质金属蛋白酶8 (matrix metalloproteinases 8, MMP-8)及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的相互关系,及其对肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)、恶性进展的影响及其分子机制。方法：1.使用transwell小室法鉴定4株HCC细胞(SK-Hep-1、HCCLM3、 HepG2、SMMC-7721)及人正常肝细胞HL-7702细胞的转移潜能；使用蛋白免疫印迹(Western blot, WB)、实时荧光定量PCR (Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测MMP-8、MMP-2、MMP-9及TGF-β1在4株不同转移潜能人HCC细胞系及HL-7702中的表达水平。2.使用免疫组织化学法(Immunohistochemistry, IHC)检测73例HCC患者组织及其配对癌旁组织中的MMP-8及TGF-β1表达水平。3.通过慢病毒(lentivirus)载体技术对HCC细胞MMP-8表达进行干扰及过表达,通过小干扰RNA (small inhibitory RNA, siRNA)及外加重组人TGF-β1蛋白(Recombinant human TGF-β1)分别对HCC细胞TGF-p1表达进行干扰及过表达； 使用WB及酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定干扰和过表达的效果：使用WB检测HCC细胞中E-caherin、N-cadherin、Snail、Twist、Akt 及 p-Akt的表达水平。使用G-LISA Rac活性检测试剂盒检测HCC细胞Rac1活性。使用划痕法及Transwell、室法分别检测HCC细胞的迁移及侵袭能力。结果：1.Transwell、室结果显示,SK-Hep-1、HCCLM3细胞侵袭能力显著高于HepG2、SMMC-7721,并高于HL-7702细胞；WB和qRT-PCR结果显示,MMP-8、MMP、MMP-9及TGF-β1在高转移潜能人HCC细胞株(SK-Hep-1、HCCLM3)中的表达高于低转移潜能人HCC细胞株(HepG2、 SMMC-7721),且4株HCC细胞株的MMP-8及TGF-β1表达均高于HL-7702细胞。2. MMP-8及TGF-β1在有侵袭转移的HCC组织中的表达高于非侵袭转移HCC组织及其相应的癌旁组织。3. MMP-8或TGF-β1的上调与HCC EMT转化、转移及侵袭相关。MMP-8可主要通过P I3K/Akt/Racl信号通路上调TGF-β1干扰株中TGF-β1的表达水平；同样,TGF-β1可部分通过PI3K/Akt/Racl信号通路上调MMP-8干扰株中MMP-8的表达水平。4.在患者HCC组织中,MMP-8表达与TGF-β1表达显著正相关；高表达MMP-8或TGF-β1与HCC病人的TNM分期、转移呈正相关关系。MMP-8及TGF-β1共同高表达与HCC的TNM分期及转移呈正相关关系,且共同高表达MMP-8和TGF-β1的HCC病人的复发时间显著短于共同低表达MMP-8和TGF-β1的病人。结论MMP-8与TGF-β1主要通过激活PI3K/Akt/Racl信号通路相互激活从而诱导HCC发生EMT转化、促进HCC侵袭及转移。