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第一部分:唑来膦酸刺激人外周血γδT细胞增殖目的:探讨唑来膦酸刺激人外周血γδT细胞的增殖作用方法:抽取10例健康捐献者外周血10ml,以密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。选用第三代双膦酸盐类药物唑来膦酸作为刺激因子,以不同浓度的唑来膦酸联合IL-2刺激外周血γδT细胞增殖。细胞培养12-14天后,收集细胞,以流式细胞仪检测相关表型, 3H-TdR掺入法测定细胞增殖程度。结果:培养12-14天后,外周血γδT细胞增殖明显,与对照组相比较,实验组γδT表型比例升高显著(对照组9.7%、实验组80.8%、P<0.01)。CD3升高显著(对照组71.2%、实验组96.2%、P<0.01)。3H-TdR掺入法测定显示实验组细胞增殖显著:(空白对照组CMP值:111.1、实验组CMP值:17488.6、P<0.01)。在所有唑来膦酸浓度中,以1μΜ浓度时,γδT细胞增殖最为明显。结论:用唑来膦酸能促进人外周血γδT细胞的增殖,得到大量高纯度的γδT细胞。第二部分:扩增的γδT细胞对人肝癌细胞的杀伤效应目的:探讨以唑来膦酸刺激增殖的γδT细胞对人肝癌细胞的杀伤作用方法:同实验一法获取健康人外周血γδT细胞,以γδT细胞作为效应细胞,分别以人肝癌细胞株SMCC-7721、MHCC-97、HepG2作为靶细胞。按照效靶比20:1、10:1共同培养48小时后终止实验,以SRB法测定效应细胞对靶细胞的杀伤效能。结果:γδT细胞对三种肿瘤细胞均表现出强大的杀伤作用,效靶比20:1时,γδT细胞对肝癌细胞杀伤率最高达98.7%,效靶比10:1时,γδT细胞对肝癌细胞杀伤率最高达92.6%。同一效靶比时,γδT细胞对不同细胞株杀伤作用无显著差异(P>0.05),不同效靶比时,γδT细胞对同一细胞株杀伤作用有显著差异(P<0.05)。结论:以唑来膦酸刺激扩增的γδT细胞在体外对肝癌细胞有显著的杀伤作用