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三叶木通(Akebia trifoliate(Thunb).Koidz)是药用木通的一种,具有多种功效,被2015版《中国药典》收载,其藤茎为主要药用部位,多糖是主要有效成分之一,但目前国内外对三叶木通藤茎多糖(ATKP)的研究较少。本试验主要对ATKP的提取、分离纯化、生物活性及其在护肤霜中的应用等方面进行了初步研究,测定了ATKP的抗氧化,抑菌和吸湿保湿等活性,并对ATKP的结构进行了初步分析。所得结果如下:(1)通过响应面法优化得出超声辅助提取ATKP的最佳提取工艺:料液比1:20(g/mL)、提取时间52 min、提取温度79℃、提取功率175 W,该条件下多糖的提取率为3.23%,与理论预测值接近。(2)多糖的分离纯化方面,分别对酶法、Sevage法和酶法+Sevage法联用的脱蛋白效果进行了比较,最终采用酶法+Sevage法,其脱蛋白条件为:酶浓度:10 mg/mL、PH值:7、酶解温度:60℃、酶解时间:1.0 h、Sevage处理3次。此条件下的蛋白脱除率为87.52%,多糖保留率为56.55%;经DEAE-cellulose柱,得到5种纯化多糖组分ATKP-Ⅰ、ATKP-Ⅱ、ATKP-Ⅲ、ATKP-Ⅳ、ATKP-Ⅴ。(3)对ATKP的体外活性的研究主要包括体外抗氧化能力,抑菌能力和体外吸湿保湿能力三方面。当ATKP浓度为10 mg/mL时,对DPPH、羟基自由基和超氧阴离子的清除率分别达到90.78%、68.44%和70.19%,还原力试验结果表明ATKP具有一定的还原能力。通过对各纯化多糖组分(ATKP-Ⅰ、ATKP-Ⅱ、ATKP-Ⅲ、ATKP-Ⅳ、ATKP-Ⅴ)的抗氧化能力的比较发现,各组分均有一定的抗氧化活性,其中以ATKP-Ⅱ抗氧化活性最佳,10 mg/mL的ATKP-Ⅱ的DPPH自由基清除率为85.63%、羟自由基清除率为57.22%、超氧阴离子清除率为63.87%,对铁离子有一定还原能力,且呈量效关系;但是纯化后各多糖组分的抗氧活性均弱于ATKP。抑菌试验表明,ATKP对枯草芽常用孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、意大利青霉、根霉和黑曲霉均具有一定的抑制效果,其中对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制效果最佳,最低抑制浓度均为2.5 mg/mL,pH对ATKP的抑菌效果有一定的影响;将ATKP与三种常用保湿剂(甘油、壳聚糖和海藻酸钠)进行体外吸湿、保湿能力比较,ATKP的吸湿、保湿效果仅次于甘油。(4)对ATKP和ATKP-Ⅱ进行理化性质的测定和初步的结构分析:结果表明ATKP的总糖、蛋白质、糖醛酸及总酚的含量分别为:68.29%、3.11%、23.23%、0.37%;ATKP-Ⅱ的中性糖、蛋白质、糖醛酸及总酚的含量分别为:86.5%、0.59%、12.08%和0.08%;二者的红外图谱均出现了多糖特征官能团-OH和-CH的吸收峰,且都有-COOH吸收峰,说明二者都有糖醛酸的存在,与理化性质测定结果一致;HPGPC分析结果显示ATKP由多种分子量的多糖组成:ATKP-Ⅱ主要由重均分子量分别为9.37 kDa和3.12 kDa的两种多糖组成;ATKP和ATKP-Ⅱ均由鼠李糖,阿拉伯糖,木糖,甘露糖,葡萄糖和半乳糖6种单糖组成,ATKP的摩尔比为:1.6:22.1:3.6:6.3:55.7:10.7,ATKP-Ⅱ的摩尔比为:0.5:22.1:3.7:10.2:42.1:21.4。(5)将ATKP作为保湿添加剂与化妆品常用保湿剂甘油进行复配加入到护肤霜中,采用体外称重法对各样品的保湿效果评价。结果表明ATKP与甘油的最佳复配比为0.8%﹕4.2%,按此比例将ATKP和甘油添加到护肤霜基础配方中,可得到一款保湿性能良好的淡黄色、质感均一细腻、稳定性好且对皮肤无刺激的保湿型护肤霜。综上,按最佳提取工艺提取,经除蛋白处理制得的ATKP具有一定的抗氧化。抑菌和吸湿、保湿能力,有望作为天然保湿剂进入化妆品领域;三叶木通藤茎纯化多糖中,ATKP-Ⅱ的抗氧化效果最佳。通过本试验,对ATKP和ATKP-Ⅱ的生物活性及其结构有了初步的认识,为后期对含ATKP护肤霜的研究提供了一定的基础,并为三叶木通藤茎资源的进一步开发提供了一个新思路。