农作物病害是一个全球性的难题,它给人类带来了巨大的经济损失。农作物病害主要是由真菌引起的。农作物病害的生物防治是利用有益微生物或微生物代谢产物对农作物病害进行有效防治的技术与方法。芽孢杆菌的诸多优势如高抗逆、分布广、生长快等特点在生物防治中受到越来越多的关注。本实验从筛选芽孢杆菌的目的出发,从黑龙江省凉水国家级自然保护区林下土壤中筛选芽孢杆菌,经过反复纯化,得到几十株芽孢杆菌。以植物病原真菌为靶标菌株,对所筛选得到的芽孢杆菌初筛和复筛,最终挑选出3株抑菌活性强的生防芽孢杆菌并保藏。从形态学鉴定、生理生化鉴定,菌株16SrDNA序列的测定三个方面对所筛选得到3株生防芽孢杆菌进行了鉴定,经鉴定,拮抗芽孢杆菌F1、F17和H1分别是短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对所筛选得到的拮抗菌株的拮抗机理进行了初步研究,发现所筛选出的拮抗芽孢杆菌F1、F17和H1的发酵代谢产物对植物病原菌都有明显抑制作用,可以初步判定筛到的拮抗芽孢杆菌F1、F17和H1都是通过发酵液中胞外分泌物对植物病原菌起到的抑菌作用,且同种拮抗芽孢杆菌对不同的植物病原菌有明显不同的抑制效果。且经过高温处理后,拮抗芽孢杆菌菌株F1、H1的发酵液仍然具有很明显的抑菌活性,而拮抗芽孢杆菌菌株F17经高温处理后,其无菌发酵液里的抗菌物质失活。利用饱和度为60%的硫酸铵沉淀短小芽孢杆菌F1的无菌发酵液,得到粗蛋白,然后经DEAE-Sepharose阴离子交换层析后,用不同浓度梯度的NaCl洗脱,其中用0.35 mol/L NaCl洗脱的组分具有抑菌活性。将具有抑菌活性的蛋白进行通过SDS-PAGE进行观察,发现该抑菌蛋白的分子量约为36.0 kDa。将得到的抗菌蛋白进行121℃处理30 min后,发现该蛋白仍然具有明显的抑菌活性。本文筛选得到了具有抑菌作用的芽孢杆菌,并初步分离纯化得到抗菌蛋白,为今后的研究奠定了基础,将为其应用于生物防治起着非常重要的作用。