论文部分内容阅读
目的：研究《金匮》酸枣仁汤抗焦虑作用与脑脊液中药物化学成分变化的相关性，为了解酸枣仁汤抗焦虑药效物质基础、作用机制及抗焦虑新药研发提供依据。基于以上研究，对“中药复方脑脊液药物化学”研究思路及方法进行了初步探索。方法：①采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）检测酸枣仁汤及其各单味药挥发性成分，比较全方与其各单味药挥发性化学成分异同；②采用高效液相色谱（HPLC）指纹图谱比较酸枣仁汤及其各单味药水煎液、酸枣仁汤含药血清、酸枣仁汤含药脑脊液中药物化学成分的异同，观察酸枣仁汤不同给药量含药血清、含药脑脊液中化学成分的差异；③采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS），对酸枣仁汤含药血清、含药脑脊液中部分化学成分进行初步鉴定；④采用酶联免疫法观察不同给药量酸枣仁汤对家兔大脑皮质GABAα-1受体mRNA表达及大脑海马区去甲肾上腺素（NE）含量的影响。结果：①在酸枣仁汤全方合煎的挥发性成分中，发现了20种化合物不属于组方中任何一个单味药，其中以1-苯基-1-戊酮的含量最高，(S)-1-甲基-4-(5-甲基-1-甲基-4-己烯基)-环己烯次之；②酸枣仁汤含药血清指纹图谱中发现2个血清固有成分，5个药源性成分，1个代谢产物；酸枣仁汤含药脑脊液指纹图谱中发现3个脑脊液固有成分，3个药源性成分，1个代谢产物；含药血清与含药脑脊液中有3个共有化合物，其中1个为代谢产物，2个为药源性成分；随给药量的增加，有的化学成分含量持续增加，有的到大剂量时才出现，有的持续减少，有的先增加再减少，到大剂量时含量达到最高；③经HPLC-MS初步鉴定，酸枣仁汤含药血清指纹图谱5个药源性成分中含有斯皮诺素、芒柄花苷、知母皂苷EI、酸枣仁皂苷BI，酸枣仁汤含药脑脊液指纹图谱3个药源性成分中含有斯皮诺素、芒柄花苷、知母皂苷BII；④随给药量的增加，家兔大脑皮质GABAα-1受体mRNA表达升高、大脑海马区NE含量下降。结论：①在酸枣仁汤全方挥发性成分中发现的20种化合物不属于组方中任何一个单味药，推测其为酸枣仁汤合煎后的产物。②斯皮诺素、酸枣仁皂苷BI、芒柄花苷、知母皂苷EI和含药血清中3号成分这5种化合物是较容易进入血液的药物化学成分。斯皮诺素、知母皂苷BII、芒柄花苷这3种化合物是较容易透过血脑屏障、进入脑脊液中的药物化学成分，推测这3种化合物可能是酸枣仁汤发挥其抗焦虑作用的中枢药效物质基础。经含药血清中与含药脑脊液中各色谱峰峰面积比较发现，酸枣仁成分更容易进入脑脊液；③可进入脑脊液的斯皮诺素、芒柄花苷、知母皂苷BII可能是酸枣仁汤抗焦虑作用的中枢药效物质基础。为酸枣仁汤抗焦虑药效物质基础、作用机制及抗焦虑新药研发提供了依据，也为安神类中药复方中枢物质基础研究提供了新的思路和方法。