目的：Müller细胞是视网膜中的主要胶质细胞，也是视网膜的主要构成细胞。以往认为Müller细胞的主要功能是支持和营养神经细胞，不主动参与神经细胞间信号的传导调节。随着对脑组织中胶质细胞研究的深入，发现胶质细胞对于神经细胞的发育、细胞间微环境的调节、神经细胞间信号的传导以及神经细胞的损伤方面都具有非常重要的功能。在青光眼神经细胞损害的过程中，研究发现细胞外高浓度谷氨酸可能是导致神经细胞凋亡的重要因素，而Müller细胞的一个主要功能就是保持细胞外谷氨酸浓度的平衡，因此对于Müller细胞在青光眼的损伤过程中究竟起什么作用尚不清楚。本研究的目的是利用造成能青光眼神经细胞损害的重要因素——谷氨酸和压力作用于培养的大鼠视网膜Müller细胞，观察其形态和功能的变化，以探讨：1、Müller细胞在青光眼神经细胞损害过程中是否受到损害；2、Müller细胞功能异常是否是视网膜细胞外谷氨酸浓度升高的原因之一。 材料和方法：采用改进的酶消化法简化Müller细胞的培养和纯化过程，对眼球进行培养前处理和机械吹打、贴壁后反复胰酶消化的方法培养新生大鼠Müller细胞，建立稳定的Müller细胞培养体系，并以免疫组化染色和光电镜观察进行细胞鉴定。 将体外培养的大鼠Müller细胞随机分为对照组和加压处理组，加压组在50mmHg压力下处理1小时，然后两组细胞继续培养3天后，使用倒置显微镜和电镜观察细胞的形态，MTT比色法测定两组细胞的活性，RT—PCR法检测两组细胞内谷氨酰胺合成酶mRNA表达，并用图像分析系统测定吸光度值。 体外培养Müller细胞，随机分为两组，一组为对照组，另一组用含50μM谷氨酸培养液培养，培养3天后，两组细胞分别使用倒置显微镜和电镜观察细胞的形态，MTT比色法观察细胞的活性，RT-PCR法检测细胞内谷氨酰胺合成酶mRNA的表达，并用图像分析系统测定吸光度值。 结果 培养的Müller细胞光镜下胞体较大，胞浆丰富，电镜下细胞器丰富中文摘要可见糖原和直径为IOnln的微丝，免疫组化示95%以上细胞谷氨酞胺合成酶阳性。 体外培养的Muller细胞经压力处理后与对照组相比倒置显微镜下改变不明显，电镜下可见细胞内空泡增多，线粒体肿胀;MTT比色法显示细胞活性降低，差别有统计学意义伊<a盯夕;Rl’- PCR法示细胞内谷氨酞胺合成酶mRNA表达减少，差别有统计学意义伊<a口J夕。 谷氨酸培养组的细胞与对照组相比倒置显微镜下无明显改变，电镜下细胞内粗面内质网较明显，MTT比色法显示细胞活性增加，差别有统计学意义伊<a盯夕，RT一PCR法检测细胞内谷氨酞胺合成酶mRNA的表达显示表达增加，差别有统计学意义伊<a0)夕。 结论l、改进的酶消化法是一种简单可信的Muller细胞培养方法。2、经压力处理后体外培养的Muller细胞有损伤的改变，细胞由于谷氨酸一谷氨酞胺循环中的关键酶谷氨酞胺合成酶mRNA表达减少而代谢谷氨酸的能力下降，这可能是青光眼损害过程中细胞外液谷氨酸浓度升高的原因之一。。3、在高浓度谷氨酸培养下，Muller细胞在形态学方面无明显损伤的改变，并呈现细胞活力增加，细胞代谢谷氨酸能力增强，因此高浓度谷氨酸对正常的Muller细胞没有造成损伤。