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[目的]研究miR-370在肺癌中的表达情况及其对肺腺癌细胞生长、侵袭等生物学行为的影响;证实miR-370对EGFR信号通路的靶向性调节;探讨miR-370在小鼠体内对肺腺癌移植瘤及转移瘤的抑制作用。[方法]1、利用网络预测系统预测miR-370对EGFR的靶向性。实时荧光定量PCR方法检测miR-370,EGFR在四株肺癌细胞系、一株正常支气管上皮细胞系及肺癌组织和相应正常组织中的相对表达水平;western-blot检测EGFR在不同类型肺癌细胞系、正常细胞系中的相对表达水平;构建野生型和突变型EGFR3’UTR双荧光素酶表达载体及miR-370 mimics,对H157及XWLC-05两株肺癌细胞进行共转染后,进行双荧光素酶检测。2、合成 miR-370 mimics 和 miR-370 inhibitor,通过脂质体转染 H1 57 及XWLC-05细胞;利用MTT实验、划痕实验、平板克隆实验及Transwell实验研究miR-370对肺癌细胞增殖、迁移、克隆形成及转移的影响;通过western-blot检测 EGFR、AKT/PAKT、ERK/PERK、HIF-1α 等指标的变化,深入探讨 miR-370分子作用机制。3、建立稳定转染的miR-370-XWLC-05、miR-NC-XWLC-05细胞;检测稳转细胞株miR-370-XWLC-05的增殖、迁移、克隆形成及转移的影响;western-blot检测EGFR、AKT/PAKT、ERK/PERK、HIF-1α等指标的变化。构建miR-370-XWLC-05、miR-NC-XWLC-05小鼠皮下移植瘤模型、转移模型。皮下移植瘤模型观察成瘤情况及肿瘤生长情况,转移模型观察小鼠生存状态及体重变化;接种后第20天处死裸鼠,测量离体肿瘤重量;肿瘤组织采用中性福尔马林固定保存并进行HE染色,免疫组织化学染色检测EGFR、Ki-67及CD31,HIF-1α的表达。4、将XWLC-05细胞分别通过皮下移植,尾静脉注射两种方式接种于裸鼠,构建小鼠皮下移植瘤模型和转移模型,每个模型均设为对照组及实验组,成瘤后以miR-370 mimics及其阴性对照进行注射。皮下移植瘤采用原位注射,转移瘤模型采用尾静脉注射。观测小鼠体重变化、成瘤情况及肿瘤生长情况;接种后第20天处死裸鼠,测量离体肿瘤重量;肿瘤组织采用中性福尔马林固定保存,进行HE染色及免疫组织化学染色,以检测EGFR、HIF-1α、Ki-67及CD31等指标的表达。[结果]1、Targetscan等网站预测EGFR有miR-370结合位点;实时定量PCR结果显示肺癌组织中miR-370低表达,EGFR呈高表达,二者呈负相关。miR-370 mimics与野生型EGFR 3’UTR共转染H157、XWLC-05,48小时后荧光表达减弱(p<0.05),提示 miR-370 可以结合EGFR3’UTR。2、miR-370 mimics 降低了 H157、XWLC-05 细胞中 EGFR 蛋白的表达(p<0.05),抑制了增殖、迁移、克隆形成及侵袭能力(p<0.05);削弱了 AKT、ERK的磷酸化水平及HIF-1α的表达,而miR-370 inhibitor则增强了 EGFR的蛋白表达(p<0.05),显著促进了 H157、XWLC-05肺癌细胞的增殖、迁移、克隆形成及侵袭能力(P<0.05),并增加AKT、ERK的磷酸化水平及HIF-1α的表达。3、成功建立miR-370高表达的XWLC-05细胞株miR-370-XWLC-05,证实其增殖,迁移,克隆形成及侵袭能力减弱(p<0.05);western-blot结果显示EGFR表达降低,AKT、ERK活化减少,HIF-1α的表达减弱;皮下移植瘤模型中,观察期间各组小鼠的体重均有增长,但组间比较差异无显著性(p>0.05)。与阴性对照组相比,miR-370高表达的实验组小鼠皮下移植瘤增长趋势明显受到抑制,差异有统计学意义(p=0.009);miR-370组小鼠离体肿瘤的重量为0.275±0.048g,显著低于阴性对照组0.725±0.103(p=0.0075);免疫组织化学染色显示:EGFR、Ki-67和HIF-1α蛋白以及微血管密度(MVD)在miR-370组细胞中的表达显著低于对照组(p<0.05);转移瘤模型中miR-370组微转移评分14.75±3.95低于对照组 39.50±5.852(p=0.0127)。4、注射miR-370mimics的实验中,观察期间皮下移植瘤模型两组小鼠的体重均有增长,至17天后组间出现差异,实验组高于对照组(p<0.05);与对照组相比,实验组小鼠皮下移植瘤增长趋势明显受到抑制,19天时实验组肿瘤大小240.3±65.51cm3小于对照组肿瘤大小498.0±75.14 cm3,差异有统计学意义(p=0.000)。实验组小鼠离体肿瘤的重量为(0.40±0.07)g,显著低于对照组(0.65±0.07)g(p=0.04);免疫组织化学染色显示实验组EGFR、HIF-1α、Ki-67表达及微血管密度显著低于对照组(p<0.05)。而在转移瘤模型中,实验组的转移瘤评分 10.50±8.35 低于对照组 35.75±7.72。(p<0.05)。[结论]1、miR-370在肺癌中低表达,可以抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移、克隆形成及侵袭能力等恶性生物学行为;2、miR-370在肺腺癌细胞中可以结合EGFR3’UTR,调控EGFR的表达;3、miR-370下调EGFR表达,抑制AKT、ERK信号通路活化,降低HIF-1α的表达;4、miR-370抑制小鼠体内肺腺癌组织的EGFR表达,降低HIF-1α的表达,从而抑制肺腺癌生长,血管生成及转移。