良性前列腺增生症(BPH)是老年男性常见病,由于它在泌尿系统所造成的梗阻,影响排尿,直接威胁肾功能,给患者的生活与健康带来严重的危害,一直是国际上研究的重要课题之一。前列腺增生的发病机制至今仍不明了,但临床研究与基础研究都表明雄激素及其下游信号通路在前列腺增生中具有关键作用。miRNA是一组广泛存在于真核生物中,不编码蛋白质的长约20-24nt的小RNA分子,可通过与靶基因的3’UTR完全或不完全匹配,降解靶基因或抑制其翻译,从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。我们实验室曾报道在前列腺癌LNCap细胞中miR-204的表达水平受雄激素的下调,并发现miR-204与前列腺癌的发生发展密切相关。鉴于我们课题组在前列腺癌中miR-204的表达和功能研究中取得的一定成果,我们推测在同样受雄激素调控的前列腺增生的组织中,miR-204作为雄激素调控的下游基因参与了前列腺增生的发生和发展。我们成功诱导了大鼠前列腺增生模型,并发现在雄激素水平逐渐增高的情况下,miR-204的表达水平降低。同时设置了去势模型和氟他胺干预前列腺增生模型,在这两种模型中,发现miR-204的表达水平与对照组相比明显上调,进一步证实了miR-204的表达水平受雄激素的负调控。同时,我们检测了miR-204的前体pre-miR-204、宿主基因TRPM3的表达变化,发现二者在不同模型里的变化趋势与miR-204有相对平行关系。进一步我们运用生物信息学技术预测miR-204的下游靶基因,在综合三种靶基因预测软件和国内外相关文献报道的基础上初步预测了FOXC1、PDEF、XRN1三种靶基因。结果显示,在miR-204表达水平逐渐升高的去势模型和氟他胺干预模型中,XRN1mRNA的表达含量逐渐降低；在miR-204表达水平逐渐降低的前列腺增生模型中XRN1的表达含量逐渐增高,而预测的其他靶基因表达水平变化无规律。进一步从蛋白水平进行检测,发现在去势模型和氟他胺干预模型中,XRN1蛋白含量有所降低,而在前列腺增生模型中,XRN1蛋白含量随着增生程度的加深有所增加。XRN1在mRNA和蛋白水平的表达变化结果充分证明了XRN1是miR-204的靶基因之一。实验结果表明,miR-204可作为雄激素的下游调节基因,参与到前列腺增生的发生、发展过程中。我们将在后续实验中进一步探索雄激素受体通过miR-204调控前列腺增生的机理。高迁移率蛋白族(high mobility group, HMG) HMG蛋白,是真核细胞内继组蛋白之后含量最为丰富的一组染色质蛋白质。研究表明HMG家族兼有染色质结构蛋白的功能和调节基因转录的功能。根据分子量大小、序列相似性和DNA结构特性,HMG可进一步分为HMGB、HMGA、HMGN3个家族。HMGB4是HMGB家族的一个新成员,我们实验室已经开展了关于HMGB4的前期研究工作,初步的结果表明HMGB4是一种核仁蛋白,其表达具有相当高的睾丸组织特异性。本研究的目的是制备人HMGB4的多克隆抗体,以方便后续用多种手段研究其功能。实验中用PCR方法扩增人HMGB4的cDNA片段,克隆于融合蛋白表达载体pET-28a(+)并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达、蛋白纯化、质谱鉴定后,成功表达了相对分子量为28000的人HMGB4融合蛋白。重组人HMGB4蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备兔抗血清。抗血清经纯化后经ELISA检测抗体效价达到1：102400；Western blot、免疫组化鉴定显示抗体能够与人HMGB4蛋白特异性结合。抗人类HMGB4多克隆抗体的成功制备为深入研究HMGB4的生物学效应,寻找与HMGB4相互作用的蛋白提供了有效工具。