论文部分内容阅读
目的:通过测定过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量在甲状腺功能亢进大鼠肾组织中的改变,了解氧化应激在甲亢性肾损伤中的作用;并通过对转化生长因子-β1（transforming growth factor -β1, TGF-β1）、足细胞骨架蛋白巢蛋白（Nestin）在甲亢模型大鼠肾组织中表达变化的观察,来探讨甲状腺功能与肾脏损伤的关系,进一步了解甲亢性肾损伤的特点及发病机制。方法:本试验通过L-T4（优甲乐）灌胃法(50μg·100g-1·d-1)制作甲状腺功能亢进大鼠模型（HT组）,饲养同时同量生理盐水灌胃大鼠作为对照组（A组）。观察连续灌胃25天（A1及HT1组）、45天（A2及HT2组）、60天（A3及HT3组）大鼠一般情况、甲状腺功能、肾功能及肾组织形态学的改变;应用组织匀浆测定肾脏中各种抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性及氧化产物（MDA）含量的改变情况;并应用免疫组织化学方法检测肾组织中TGF-β1、Nestin在肾组织中的表达;同时检测24h尿蛋白排泄情况。结果:1一般情况对照大鼠饮食水情况、外观、精神状态及日常活动较灌胃前无明显变化,并且对照大鼠平均体重稳定增加。甲亢大鼠饮食、饮水较对照组明显增加;大便呈糊状,并含有不消化食物;毛色无光泽,大部分出现严重的脱毛现象;活动增加、惊恐躁动、易受激惹及肌肉细微震颤;并且体重较同期对照组减轻（p<0.05）,而肾重/体重与同期对照组相比显著增加（p<0.01）。2甲状腺功能检查甲亢组在25、45、60天时,FT3及FT4均较同期对照组显著增高（P<0.01）, TSH较同期对照组显著降低（P<0.01）;甲亢三组间甲功水平亦存在显著差异,随着优甲乐作用时间的延长,FT3、FT4进行性增加而TSH进行性减低（ P<0.01）。3血肌酐、24h尿蛋白定量改变甲亢组血肌酐在25天及45天时与同期对照组相比无明显差异（P>0.05）。在60天时,甲亢组Scr比同期对照组显著增高（ P<0.05）,亦显著高于HT1组及HT2组（ P<0.05）。甲亢组在25天时24h尿蛋白定量较同期对照组增高（P>0.05）。在45天和60天时24h尿蛋白定量均较同期对照组显著增高（ P<0.01）。甲亢三组间相比其24h尿蛋白定量也存在显著差异（P值均小于0.01）。4肾组织中氧化应激指标甲亢组CAT、GSH-Px、SOD活性均较同期对照组显著降低（ P<0.01）。甲亢三组间抗氧化酶指标亦存在显著差异,随病程延长各酶活性进行性降低。HT3组CAT、SOD活性较HT1及HT2组均显著降低（ P<0.01）; HT3组GSH-Px活性较HT1及HT2组亦显著降低（P值分别小于0.01及0.05）。HT2组大鼠GSH-Px、SOD活性较HT1组显著降低（ P<0.01）,HT2组CAT活力较HT1组亦显著降低（ P<0.05）。甲亢组MDA含量均较同期对照组显著增加（ P<0.01）。三组间MDA亦存在显著差异（ P<0.01）,随病程延长MDA含量进行性增加。5病理改变透射电镜:正常组大鼠肾小球足细胞结构完整,足突排列整齐清晰。甲亢组大鼠肾小球基底膜厚度不均匀增加;足细胞足突局灶性融合,有的甚至消失;毛细血管内皮窗孔径增大;足细胞线粒体峭部分或大部分融合或消失,部分膜融合或消失;粗面内质网有脱颗粒相象;系膜细胞和内皮细胞增生肿胀,系膜基质增多;并且这些病变随着甲亢病情的加重而加重。6免疫组化结果TGF-β1结果:对照组TGF-β1的表达较少,阳性染色物主要位于胞浆;甲亢组在肾小球和肾小管均有TGF-βl蛋白表达增多,随着甲亢病程的进展,TGF-β1表达呈递增趋势。甲亢组与同期对照组相比,在25天时TGF-β1阳性面积百分率显著增加（P<0.05）,在45天和60天时阳性面积百分率增加的更明显（P<0.01）。甲亢三组间亦存在显著差异, HT3组较H1及HT2组均显著增加（ P<0.01,P<0.05）; HT2组较HT1组亦显著增加（ P<0.05）。Nestin结果:甲亢组与同期对照组相比,在25天时Nestin阳性面积百分率稍减少,但无统计学意义（P>0.05）,在45天和60天时显著减少（P<0.05, P<0.01）。甲亢三组间亦存在差异, HT2及HT3组较HT1组均显著减少（ P<0.01）; HT2组与HT3组无显著差异（ P>0.05）。7甲状腺功能、组织匀浆指标、TGF-β1及Nestin之间相关性的分析结果CAT、GSH-Px、SOD活性与FT3、FT4呈负相关,与TSH呈正相关;MDA含量与FT3、FT4呈正相关,与TSH呈负相关。TGF-β1的表达与FT3、FT4呈正相关,与TSH呈负相关;与抗氧化酶活性呈负相关,与MDA含量呈正相关。Nestin与FT3、FT4呈负相关,与TSH呈正相关;与CAT、GSH-Px、SOD呈正相关,与MDA含量负相关。24h尿蛋白定量与FT3、FT4正相关,与TSH负相关;与TGF-β1正相关;与Nestin负相关。结论:本试验通过L-T4（优甲乐）灌胃法制作甲状腺功能亢进大鼠模型,甲亢组大鼠表现出的症状、体征及甲状腺功能检查均符合甲亢的特点。随着甲亢病程的进展出现肾脏损伤,表现为肾脏肥大、血肌酐的升高、蛋白尿的出现;并且肾组织中CAT、GSH-Px、SOD活性逐渐降低,MDA含量逐渐升高。说明甲状腺激素水平的增高可以影响肾脏正常的生理功能;甲状腺功能亢进大鼠肾脏组织中存在氧化应激,且其在甲亢性肾损伤中起着一定的作用。TGF-β1在肾组织中的表达也随甲亢病程的延长而逐渐增加,并且与氧化应激水平有一定的相关性,表明TGF-β1可能通过氧化应激介导肾损伤,从而出现蛋白尿并最终导致肾小球硬化。对足细胞骨架蛋白巢蛋白的研究发现,其表达随甲亢病程的延长而逐渐减少,并且与病理改变密切相关,与甲状腺功能亢进程度呈相关性。说明足细胞损伤在甲亢肾脏损伤过程中起着重要的作用。