辛伐他汀对高糖诱导乳鼠心肌细胞损伤的干预作用及其机制研究

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目的:1、观察乳鼠心肌细胞对高浓度葡萄糖刺激的反应,探讨其可能的机制。2、观察辛伐他汀对高浓度葡萄糖刺激下心肌细胞损伤的干预作用,并探讨其可能机制。方法:1、取SD乳鼠心肌细胞做原代培养。2、空白对照组(control组):不加任何刺激药物,仅用含有20%胎牛血清的DMEM培养基继续培养72小时。3、高糖刺激组(high glucose,GS组):含有20%胎牛血清的DMEM培养基中加入终浓度为25mmol/L的葡萄糖培养72小时。4、辛伐他汀(simvastatin,Sim)干预组:含有20%胎牛血清的高糖(葡萄糖终浓度为25mmo1/L)DMEM培养基中,加入终浓度分别为10-7、10-6、10-5mol/l(M)的辛伐他汀培养72小时,分别为GS+10-7MSim组、GS+10-6MSim组、GS+10-5MSim组。5、甲羟戊酸对照组(GS+MVA组):含有20%胎牛血清的高糖(葡萄糖终浓度为25mmo1/L)DMEM培养基中,加入终浓度为0.2mmol/l(mM)甲羟戊酸培养72小时。6、甲羟戊酸干预组(GS+10-5MSim+MVA组):含有20%胎牛血清的高糖(葡萄糖浓度为25mmo1/l) DMEM培养基中加入终浓度10-5M辛伐他汀及0.2mmol/l甲羟戊酸培养72小时。7、用MTT比色法测细胞活力,按照各自检测试剂盒说明测定培养基中LDH活力、MDA含量、NO含量、SOD活力、Caspase-3表达、细胞内GSH的含量和ROS浓度,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞内NADPH氧化酶p22phox、p47phox亚基mRNA的表达水平, Western blot测定细胞内p38MAPK蛋白的表达。结果:1、与空白对照组比较,高糖刺激组细胞活力明显降低(P<0.01),LDH活力、MDA水平显著增加(P<0.01),SOD活力、GSH含量显著降低(P<0.01),ROS产生显著增高(P<0.01),Caspase-3表达显著升高(P<0.01),细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA表达明显增加(P<0.01),分别达对照组的2.26及2.08倍;且p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01),达对照组的2.6倍。2、在终浓度为25mmol/L葡萄糖基础上,分别加入终浓度为10-7、10-6、10-5M辛伐他汀干预后,与GS组比较,辛伐他汀(simvastatin,Sim)干预组心肌细胞活力、SOD活力、GSH含量明显增加(P<0.05),LDH活力、MDA含量、Caspase-3表达显著降低(P<0.05),ROS产生显著降低,细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA及p38MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。辛伐他汀浓度与心肌细胞活力显示出良好的剂量一效应关系,随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞活力相应提高。当辛伐他汀终浓度为10-5M时,显示出对培养乳鼠心肌细胞最佳的保护作用,心肌细胞活力达90.80%。3、在终浓度为25mmol/L葡萄糖基础上,单纯加入甲羟戊酸组与加入10-5M辛伐他汀、200umol/L甲羟戊酸后,上述指标的表达与葡萄糖刺激组无明显差异(P>0.05),甲羟戊酸完全逆转了辛伐他汀对高糖诱导的心肌细胞损伤的保护作用。结论1、高浓度葡萄糖刺激诱发心肌细胞氧化应激反应,损伤心肌细胞;2、辛伐他汀干预减轻高浓度葡萄糖刺激诱发的心肌细胞损伤,这种作用与辛伐他汀抑制高浓度葡萄糖刺激诱发的心肌细胞氧化应激反应有关;3、辛伐他汀对高糖刺激心肌细胞损伤的保护作用可被甲羟戊酸阻断;4、辛伐他汀抑制高浓度葡萄糖刺激诱发的心肌细胞氧化应激损伤的作用是通过NADPH氧化酶-ROS-p38MAPK信号通路及抑制甲羟戊酸通路实现的。
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