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目的:研究骨碎补柚皮苷和三七总皂苷作用于人牙周膜细胞后,细胞分化和超微结构的影响,为进一步探讨其对人牙周膜细胞的作用提供实验基础。 方法:(1)体外分离培养人牙周膜细胞,运用组织块法;观察原代培养的人牙周膜细胞和传代培养的人牙周膜细胞形态特征,免疫组化检测细胞表面标志物,对人牙周膜细胞进行鉴定;(2)采用MTT法检测不同浓度骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用于人牙周膜细胞后,细胞增殖情况;(3)采用酶动力法检测骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用于人牙周膜细胞后,碱性磷酸酶活性的变化;(4)采用Western blot法检测骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用于人牙周膜细胞后,细胞碱性磷酸酶表达;(5)观察骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用于人牙周膜细胞后超微结构的变化运用透射电镜。 结果:(1)组织块法培养所得细胞经过表型免疫组化鉴定:波形丝蛋白在人牙周膜细胞内表达阳性,角蛋白在人牙周膜细胞内表达阴性。(2)实验组细胞增殖显著高于对照组,骨碎补柚皮苷增殖最明显的质量浓度为1 mg.L-1,三七总皂苷以1 mg.L-1质量浓度下增殖最明显,骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用后,较其余药物组增殖明显。(3)骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷联合三七总皂苷均能促进碱性磷酸酶活性增强,活性作用增强最明显为骨碎补柚皮苷联合三七总皂苷组。(4)骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷联合三七总皂苷作用于人牙周膜细胞后,碱性磷酸酶表达优于对照组,表达作用最明显为两药联合用药组。(5)骨碎补柚皮苷、三七总皂苷、骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用下,核糖体、粗面内质网较对照组明显增多,联合用药组最明显。 结论:骨碎补柚皮苷和三七总皂苷联合作用于人牙周膜细胞,对其成骨分化和超微结构具有协同作用。