结核杆菌多肽抗原诱导了Balb/c 3T3成纤维细胞AQP1的表达

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang_yingliang
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目的水分子通道蛋白广泛存在机体各器官组织,已克隆的哺乳动物水通道家族有13个成员(AQP0~AQP12),其中AQP1是发现最早和研究最多的水分子通道蛋白,在生理和病理过程中都发挥着重要的作用。炎症、应激、肺损伤或ARDS均可诱导AQP1表达的变化,许多致病的细菌毒素、病毒也可以影响AQP1表达;有研究显示AQP1参与了增殖和凋亡,但仍存在争议。结核杆菌无内、外毒素和侵袭性酶类,其致病因子主要为菌体成分。作为结核菌体主要成分的MTb-Ag在结核致病过程中起到重要作用。本试验用结核杆菌多肽抗原作用于Balb/c 3T3成纤维细胞,观察细胞形态变化,检测AQP1表达量的变化,初步探讨结核杆菌多肽抗原对AQP1表达的影响。方法1、实验分组:正常对照组;结核杆菌多肽抗原10μg/ml组;结核杆菌多肽抗原30μg/ml组。2、western blot检测AQP1蛋白量,倒置显微镜观察细胞形态学变化。3、免疫荧光检测用chamber slide爬片后的各实验组Balb/c 3T3成纤维细胞的AQP1表达量的变化。结果1、在10μg/ml结核杆菌多肽抗原中孵育1-3天者较正常对照组细胞增长加快,在30μg/ml结核杆菌多肽抗原中孵育1-2天者细胞明显死亡,到第3天时细胞基本全部死亡。2、western blot检测AQP1蛋白量,加入结核杆菌多肽抗原10μg/ml组较正常对照组细胞AQP1表达明显增加,而加入结核杆菌多肽抗原30μg/ml组较正常对照组细胞AQP1表达变化不太明显。3、免疫荧光检测AQP1的荧光强度,结核杆菌多肽抗原10μg/ml与成纤维细胞作用1-3天者较正常对照组细胞荧光强度均明显增强。讨论结核杆菌多肽抗原10μg/ml孵育Balb/c3T3成纤维细胞,Western Blot及免疫荧光的结果明确证实AQP1的表达明显增加,而30μg/ml组则明显死亡并于第三天基本全部死亡。10μg/ml的MTb-Ag有诱导Balb/c3T3成纤维细胞AQP1表达的作用,而30μg/ml的MTb-Ag可能由于毒性过大而出现致死作用。提示AQP1可能参与了结核的发病机制,但仍需进一步的实验证实。结论结核杆菌多肽抗原诱导Balb/c3T3成纤维细胞AQP1表达显著增加,提示AQP1可能参与了结核的发病机制。
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