中华蜜蜂(Apis cerana)毒腺cDNA文库的构建及主要毒蛋白基因表达调控研究

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本研究构建了中华蜜蜂毒腺cDNA文库,以期从中找出一些对人类健康有重要意义的生理活性蛋白或多肽;同时对溶血肽和磷脂酶A2在蜜蜂体内的表达从基因的拷贝数、转录/转录后水平以及蛋白表达水平三个方面综合进行研究,取得了一些进展,丰富了蜜蜂毒蛋白分泌生物学研究的内容。 首先,对两种蜜蜂毒液的双向电泳进行了分析,构建了中华蜜蜂毒腺cDNA文库;其次,研究了蜜蜂毒腺溶血肽(melittin)基因表达,结果表明中华蜜蜂毒腺内的溶血肽RNA水平只在刚刚羽化至其后的6天时间内有较高的丰度,而在其他发育时期则没有检测到。研究了蜜蜂毒腺磷脂酶A2(PLA2)基因表达,结果表明,PLA2基因在蛹期基本没有转录,羽化后的一个星期时间里,转录十分活跃,毒腺内具有高丰度的mRNA,而在8日龄的时候,mRNA丰度就降低许多,至10日龄,基本上就检测不到,成年蜜蜂在随后的时间里基本检测不到。最后,研究了磷脂酶A2(PLA2)基因翻译后糖基化修饰,结果表明,中华蜜蜂毒液内PLA2的糖基化过程是逐步进行的,主要发生在羽化后的8-12日龄。毒液内的PLA2是3种不同程度的糖基化产物的混和体。中华蜜蜂不同的个体之间毒液内的磷脂酶A2的糖基化情况不同。有些个体只有一种糖基化形式的磷脂酶A2,且其分子量为最大的一种,附加的糖链最多。而有些个体则具有所有三种不同形式的磷脂酶A2。
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