随着RP液相色谱柱颗粒技术的进步,基于纳克有机合成与分析同步一体化技术,用于非共轭有机阴离子型化合物分析的间接光度色谱法具有了广阔的应用前景。传统反相间接光度色谱理论已无法揭示以色谱柱为反应器的物理和化学共同作用的过程,需要提出并证实新的作用机理模式。本文依据新的作用机理和试验数据建立了膦酸(盐)类农药代表性品种草甘膦、三乙膦酸铝的亲核加成间接光度色谱定量分析方法。通过在样品中添加阴离子评价其对样品测定结果的影响。在EC-CD和IP-RP-HPLC-ELSD研究工作的基础上,试验通过DAD、ELSD检测器双通道同步监测,筛选出高效、易得、廉价、低毒、安全的离子对探针试剂二苯胍,优化出RP8分析柱、乙酸、丙酸改性剂的浓度,开发出亲核加成间接光度反相高效液相色谱法,同时获得方法学数据及定性(LC-Q/TOF).定量的(IEC-CD等)确证。草甘膦、三乙膦酸铝离子对化合物理论值分别为m/z380.1244u、m/z321.1237u,测量值分别为m/z380.1316u、m/z321.1307u.二组试验数据和延迟10s的ELSD信号证实了色谱柱上亲核加成反应的发生及共价离子对化合物的生成。根据试验结果,依据生成含共轭体系的共价键化合物,提出并证实三电层为主的亲核加成反应混合作用机理模式。固定相表面单分子层,高密度的酰胺极性基团(第一电层)静电吸附流动相中的饱和一元羧酸阴离子(第二电层)。受一元羧酸共振杂化体的影响,二苯胍阳离子(第三电层)靠静电力也会吸附其上形成自身静态的三电层。实测固定相上二苯胍分布密度高于平衡后的流动相,大约14倍。创造液液分离界面形成非匀相体系是纳克有机合成的关键,也是亲核加成间接光度色谱法得以应用的前提。建立了以二苯胍为离子对探针试剂的反相高效液相色谱分析草甘膦含量的方法。采用RP8色谱分析柱,流动相为0.12mmol·L-1二苯胍/2mmol·L-1丙酸水溶液,流速为1.2mL·min-1,232nm3D采样检测。在上述分析条件下,草甘膦与H2PO4-、NO2-、亚硝基草甘膦、Br-、SO42-可以获得分离。本方法的LOD10ng。在草甘膦浓度5～600mg·L-1范围内,进样质量与峰面积呈良好的线性关系,回归方程Y=-1.20076X105+1.5464X106X,r=0.9996。20mg·L-1和200mg·L-1两个质量浓度添加水平的平均回收率为100.09%～100.86%。8次平行样品测定RSD为0.41%。本方法适用于草甘膦的原药、异丙胺盐水剂的测定。由于草甘膦铵盐水剂中Cl-含量较高,二者离子对化合物未获得基线分离。同样以二苯胍为离子对探针试剂,开发了三乙膦酸铝的反相高效液相间接光度色谱定量分析方法。采用RP8色谱分析柱,流动相为0.12mmol·L-1二苯胍/30mmol·L-1乙酸水溶液,流速为1.2mL·min-1,3D采样,紫外检测器232nm测定。在上述分析条件下,三乙膦酸铝可与H2PO3-、SO42杂质离子对化合物获得分离。本方法的LOD10ng。在三乙膦酸铝浓度5～600mg·L-1范围内进样分析,线性回归方程为Y=-5.91067×105+3.2255×103X, r=0.9945,线性关系良好。20mg·L-1和200mg·L-1两个质量浓度添加水平的平均回收率分别为99.85%～99.97%。8次平行样品测定RSD为0.77%。本方法适用于三乙膦酸铝原药、可湿性粉剂的测定。由于样品中的杂质无机阴离子也会与离子对探针反应生成离子对化合物,因此对其影响进行了分析测定,明确了样品中不同浓度的无机阴离子对草甘膦、三乙膦酸铝间接光度色谱法测定结果的影响。试验结果表明当在草甘膦样品中添加Br-≤4.98%、NO2-≤4.31%、H2PO4-≤4.98%、SO42-≤13.04%、Cl-≤0.30%时,草甘膦定量结果将不会受到影响。实测草甘膦原药、制剂样品时,各种阴离子含量分别为Cl-0.14～0.84%、H2PO4-0.16～0.22%、SO42-0.03～0.16%、NO2-0.05～0.08%、Br-0.63%。当三乙膦酸铝样品中含有的H2PO3-、SO42≤31.03%时对三乙膦酸铝定量结果没有影响。实测三乙膦酸铝原药和可湿性粉剂中的H2PO3-、SO42-含量分别为5.88～8.49%、4.74～11.22%,所以这两种离子对测定结果的影响可忽略。本文开发的膦酸(盐)类农药的亲核加成间接光度色谱法操作简便、快速、分析成本低、环境相容性好,对同类型化合物分析具有实用性与指导意义。本研究涉及的纳克有机合成对于常规有机合成,制备克级新的有机化合物具有潜在应用价值和指导意义。