海湾扇贝分子标记的研究及应用

来源 :中国科学院研究生院(海洋研究所) | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuyaping0316
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本文以海湾扇贝4个养殖群体为研究对象,采用随机引物多态性DNA(RAPD)技术进行了群体遗传学研究,并尝试使用4个群体中代表个体的内转录间隔区(ITS)序列比对分析结果作为参考;另外,本文还运用RAPD技术对人工异体交配的2个海湾扇贝家系的杂交成功率进行了分析,均获得成功证实,并评估了两个家系构建遗传连锁图谱的潜力。主要结果如下:1.采用20条随机引物对4个群体80个个体(每个群体20个个体)进行了RAPD群体遗传多样性分析,共扩增出132个位点,片段大小在230-2800bp之间,平均每条引物的扩增带数是6.6条。4个群体的多态位点比例分别为浙江31.82%、加拿大29.55%、墨西哥湾扇贝31.82%、美国二代28.79%;平均杂合度分别为浙江0.1078、加拿大0.1134、墨西哥湾扇贝0.1197、美国二代0.0966。从遗传距离分析,浙江群体与加拿大群体较为接近,两者间的遗传距离为0.0319,而墨西哥湾扇贝群体与美国二代群体较为接近,两者间的遗传距离为0.0368。4个群体间的遗传分化系数Gst为0.1892,若将这4个群体看作一个总群体,则总群体的遗传变异中有18.92%是由4群体间的基因差异产生的。2.测得4个群体代表个体的ITS部分序列,比对蜗牛A. rufus的5.8S序列确定其ITS1与ITS2区域。用于比较的序列长约350bp,观测一级结构,加拿大、墨西哥湾扇贝和美国二代个体的ITS1和ITS2序列几乎完全相同,而浙江个体则具有较多的插入位点与片段;4个个体平均G+C含量46.8%,其中浙江个体为48.3%,其它3个个体均为46.2%左右;转换颠换比与遗传距离主要存在于浙江个体与其它3个个体之间,分别为0.8和0.07左右;以栉孔扇贝作外群构建的分子系统树表明:浙江群体已产生了一定的分化。3.在海湾扇贝Pb-Pa与Y1-P0家系中,分别筛选出12和10条引物,其扩增出的产物在双亲中呈现多态的片段。Pb-Pa家系中,12条引物扩增出的122条片段内有37条(30.3%)在亲本中呈多态性,根据卡方(P>0.05)检验,其中26条(16条来自母本,10条来自父本)标记为1:1分离;Y1-P0家系中,10条引物扩增出的95条片段内有32条(33.7%)在亲本中呈多态性,卡方检验显示其中22条(10条来自母本,12条来自父本)标记为1:1分离,表明2个家系在连锁图谱构建方面均有较好的应用价值,相比之下,Y1-P0家系可能更适合作为作图群体。根据亲本特异性分子标记在子代中的重现情况判断,每个待检的杂交家系F1个体均出现了双亲的特异性标记,证明2个家系的杂交均获得成功且成功率均为100%。
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