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RANKL/RANK/OPG系统的失衡已被大量文献证实与THA术后无菌性松动引起的假体周围骨溶解密切相关，但感染松动引起的假体周围骨溶解其发病机制则鲜见报道。本研究拟通过检测RANKL/RANK/OPG信号通路在体外细胞和界膜组织中的表达情况，探讨RANKL/RANK/OPG系统是否与感染松动引起假体周围骨溶解的发病相关。 第一章 RANK在巨噬细胞中的表达 目的:探讨凝血酶和UHMWPE颗粒处理后巨噬细胞中RANKmRNA的表达差异。 方法:用佛波酯将U937单核细胞诱导为巨噬细胞，通过细胞形态学观察、免疫学标志检查及体外吞噬功能检测等方法鉴定是否成功。将UHMWPE颗粒用球磨机研磨后进行其直径、性质和内毒素含量检测。将诱导成功的巨噬细胞分别与凝血酶和制备好的UHMWPE颗粒共同培养，MTT法检测凝血酶和UHMWPE颗粒对巨噬细胞的最佳浓度。将巨噬细胞分为细胞+凝血酶组、细胞+UHMWPE颗粒组和单纯细胞组（对照组），实时荧光定量PCR技术检测RANK mRNA在三种巨噬细胞中的表达差异。 结果:U937单核细胞经佛波酯处理后能成功被诱导为巨噬细胞，具备巨噬细胞的形态特征、表达特异的分化抗原CD14和较好吞噬能力。研磨后UHMWPE颗粒平均直径约为8.46μm±6.30μm，内毒素含量为0.053 EU/ml，符合实验要求。MTT法检测凝血酶和UHMWPE颗粒对巨噬细胞的最佳浓度分别为50 U/ml和0.1 mg/ml。经颗粒处理后的巨噬细胞，其RANK mRNA的表达水平明显高于其他两组，P＜0.01，而凝血酶处理组RANK mRNA的表达水平也明显高于对照组，P＜0.01。 结论:U937单核细胞能被佛波酯成功诱导为成熟的巨噬细胞。凝血酶处理后巨噬细胞中RANK mRNA的表达水平明显升高，但RANK mRNA的升高水平不如UHMWPE颗粒处理后明显。 第二章 RANKL、OPG在hFOB1.19成骨细胞中的表达 目的:探讨凝血酶和UHMWPE颗粒处理后hFOB1.19成骨细胞中RANKL和OPG mRNA的表达差异。 方法:将hFOB1.19成骨细胞分别与凝血酶和UHMWPE颗粒共同培养，MTT法检测凝血酶和UHMWPE颗粒对巨噬细胞的最佳浓度。将hFOB1.19细胞分为细胞+凝血酶组、细胞+UHMWPE颗粒组和对照组，用实时荧光定量PCR技术检测经三组hFOB1.19细胞中RANKL、OPG mRNA的表达差异及RANKL/OPG的表达比率。 结果:MTT法检测凝血酶和UHMWPE颗粒对hFOB1.19细胞的最佳浓度分别为50 U/ml和0.1 mg/ml。经颗粒处理后的hFOB1.19细胞，其RANKL和OPG mRNA的表达水平均明显高于其他两组，P＜0.01，而凝血酶处理组RANKL和OPG mRNA的表达水平也明显高于对照组，P＜0.01。RANKL/OPG比率，颗粒处理组同样高于其他两组，但凝血酶处理组与对照组之间无统计学差异(P＞0.05)。 结论:UHMWPE颗粒处理hFOB1.19细胞后，RANKL、OPGmRNA表达明显升高，RANKL/OPG比率增加。凝血酶处理hFOB1.19细胞后能促进细胞RANKL、OPG mRNA的表达，但作用不如UHMWPE颗粒明显。 第三章 RANKL/RANK/OPG系统在感染界膜中的表达 目的:探讨RANKL/RANK/OPG系统在感染界膜、无菌性松动界膜和正常滑膜中的表达差异。 方法:收集17例感染界膜组织、26例无菌性松动界膜组织及12例正常滑膜组织，用扫描电镜及透射电镜对三种组织进行微观形态的观察。用实时荧光定量PCR技术检测三种组织中RANKL、RANK和OPG mRNA的表达差异，用免疫组化法和Western-blot法检测三种组织中RANKL、RANK和OPG蛋白的表达差异。 结果:三种组织的微观形态有明显差异，扫描电镜可见无菌性松动界膜表面广泛分布磨损颗粒，感染界膜在透射电镜下中可见到杆菌的存在。无菌性松动界膜组织中RANKL、RANK及OPG mRNA的表达均明显高于其他两组，P＜0.01。感染界膜中RANKL mRNA的表达较其在正常滑膜中上调，P＜0.05;但RANK、OPG mRNA在这两种组织中的表达无统计学差异，P＞0.05。RANKL/OPG比率，无菌性松动界膜组(P＜0.01)与感染界膜组(P＜0.05)的RANKL/OPG比率均高于正常滑膜组。无菌性松动界膜组织中RANKL、RANK蛋白的表达均明显高于其他两组，P＜0.01。感染界膜中RANKL蛋白的表达较其在正常滑膜中上调，P＜0.05，OPG蛋白在这两种组织中的表达无明显统计学差异，P＞0.05。 结论:感染界膜中RANKL的表达上调，RANKL/OPG比率的上升，感染松动引起的假体周围骨溶解机制与RANKL/RANK/OPG系统失衡相关，但RANKL/RANK/OPG系统失衡并不是其唯一的发病机制。