【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨HPV16通过调控ICAT表达从而促进宫颈癌增殖、侵袭、转移以及EMT进程的分子机制。方法:（1）利用小片段干扰RNA外源性敲低HPV16+宫颈癌细胞株SiHa和CasKi中E6,E7的表达后,检测miR-23b-3p和ICAT的表达水平。（2）利用Target Scan（http://www.targetscan.org）、Star Basev3.0（http://starb
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目的:本研究旨在探讨HPV16通过调控ICAT表达从而促进宫颈癌增殖、侵袭、转移以及EMT进程的分子机制。方法:（1）利用小片段干扰RNA外源性敲低HPV16+宫颈癌细胞株SiHa和CasKi中E6,E7的表达后,检测miR-23b-3p和ICAT的表达水平。（2）利用Target Scan（http://www.targetscan.org）、Star Basev3.0（http://starbase.sysu.edu.cn/）和miRBase（http://www.mirbase.org/）数据库分析预测miR-23b-3p与ICAT mRNA3’-UTR的结合位点,利用双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p与ICAT mRNA 3’-UTR直接结合。（3）在宫颈癌细胞SiHa和CasKi中,分别转染miR-23b-3p mimic或miR-23b-3p inhibitor,构建过表达或者敲低miR-23b-3p的重组细胞。CCK-8实验、wound healing实验、Transwell实验和Western blot检测重组细胞的增殖、横向迁移、纵向迁移、侵袭能力及EMT的改变。（4）将miR-23b-3p mimic和Ad-ICAT分别共转染SiHa和CasKi细胞,利用CCK-8,wound healing实验,Transwell实验及Western blot实验观察过表达ICAT能否逆转miR-23b-3p mimic对宫颈癌细胞增殖、横向迁移、纵向迁移侵袭能力和EMT的影响。（5）将HPV16 E6,E7的siRNA和miR-23b-3p inhibitor分别共转染SiHa和CasKi细胞,利用CCK-8,wound healing实验,Transwell试验及Western blot试验观察抑制miR-23b-3p表达后,能否逆转HPV16E6,E7 siRNA对宫颈癌细胞增殖、横向迁移、纵向迁移、侵袭、EMT能力及ICAT表达的抑制作用。结果:外源性敲低E6,E7表达后,宫颈癌SiHa和CasKi细胞中ICAT的mRNA及蛋白质水平均显著下降,同时q RT-PCR检测发现miR-23b-3p表达水平显著升高。双荧光素酶报告实验证实miR-23b-3p可以与ICAT mRNA 3′UTR结合。过表达miR-23b-3p或抑制miR-23b-3p的表达后,SiHa和CasKi细胞中ICAT的表达下调或上调。CCK-8实验、wound healing实验、Transwell实验显示:在SiHa和CasKi细胞中过表达miR-23b-3p后能抑制宫颈癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力;Western blot检测EMT蛋白标志物的表达水平发现,过表达miR-23b-3p抑制宫颈癌细胞EMT进程。在rescue实验中,过表达SiHa和CasKi细胞中ICAT,可部分逆转miR-23b-3p mimic转染对宫颈癌细胞增殖,迁移,侵袭及EMT进程的抑制作用;而干扰SiHa和CasKi细胞中HPV16 E6,E7表达同时抑制miR-23b-3p的表达,可部分逆转HPV16 E6,E7 siRNA介导的对SiHa和CasKi增殖,迁移,侵袭及EMT进程的抑制作用。结论:HPV16 E6,E7可通过miR-23b-3p调控ICAT的表达,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭和EMT。
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