【摘 要】
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紫色紫孢菌(Purpureocillium lavendulum)是一种重要的线虫生防真菌,真菌侵染宿主过程中,分生孢子量的多少直接影响其侵染效率。为了研究其产孢调控通路,通过Blast检索了紫色
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紫色紫孢菌(Purpureocillium lavendulum)是一种重要的线虫生防真菌,真菌侵染宿主过程中,分生孢子量的多少直接影响其侵染效率。为了研究其产孢调控通路,通过Blast检索了紫色紫孢菌的全基因组,确定了可能存在的产孢调控上游相关基因并进行了敲除。之后对敲除株产孢相关的表型进行了研究,初步阐述紫色紫孢菌产孢调控上游相关基因的功能,为研究紫色紫孢菌分生孢子产生的调控机制奠定了基础。此外,实验发现紫色紫孢菌对秀丽隐杆线虫线虫的毒杀是一个长期的过程,为了研究在真菌-线虫互作过程中,紫色紫孢菌是如何侵染秀丽隐杆线虫的,秀丽隐杆线虫又是如何防御的,对紫色紫孢菌侵染线虫的两个不同阶段进行了互作转录组分析,进一步的了解紫孢菌在侵染线虫肠道组织过程中释放哪些毒力因子。同时探明线虫肠道识别该真菌并引起相应的天然免疫途径的分子机制。主要研究结果:1.紫色紫孢菌产孢调控上游相关基因的敲除用氯嘧磺隆抗性基因(sur)为筛选标记构建了敲除载体,通过农杆菌介导转化紫色紫孢菌,通过同源重组原理敲除目的基因。成功获得了Δflu G_1、Δflu G_2、Δflb A、Δflb C和Δflb D五个突变株和Δflu_1GΔflu G_2双突变株,结果发现Δflb A菌丝生长稠密,产孢量显著减少,一段时间后整个菌落自溶;Δflu G_2菌株产孢延迟,但是并不影响产孢量;Δflu G_1菌株、Δflb C菌株和Δflb D菌株营养生长受到抑制,但是产孢量会有所增加;Δflu G_1Δflu G_2双突变株营养生长与Δflu G_2菌株一致,但是产孢量减少了约三分之一。2.收集了紫色紫孢菌侵染秀丽隐杆线虫的两个不同阶段的样品,应用RNASeq技术对18个样品进行了转录组测序及表达差异分析,初步确定了DAF-2胰岛素/类胰岛素生长因子信号通路、p38 MAPK通路、TGF-β通路等秀丽隐杆线虫先天免疫途径在应对紫色紫孢菌的侵染中发生显著变化。本论文的主要创新点首次对紫色紫孢菌产孢调控上游相关基因功能进行了研究,首次研究了食线虫真菌紫色紫孢菌与秀丽隐杆线虫的相互作用,为寻找真菌侵染线虫的新机制,新的线虫免疫途径,为构建高效安全的线虫生防菌奠定基础。
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