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目的急性播散性脑脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis,ADEM)是一种中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)是由活化T细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病,被认为是ADEM的理想动物模型。神经干细胞是一种具有自我更新能力的细胞,可增殖分化为中枢神经系统内的3种基本细胞:神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。因具有一定的自我更新和分化能力,从而在临床上有广阔的应用前景。神经生长因子(nerve growth factor,NGF)作为第一个被发现的神经营养因子,是神经系统最重要的生物活性分子之一,是神经系统维持正常发育和功能的必要因素。NGF能够促进发育中的感觉神经元和交感神经元的存活及分化,参与损伤神经再生和功能修复,并且参与维系神经、免疫和内分泌系统之间的平衡。本实验通过建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型,给予神经生长因子(NGF)治疗,检测NGF对EAE神经干细胞增殖、分化表达水平的影响来探讨NGF在EAE时对神经干细胞增殖及向星形胶质细胞分化的影响。方法1、选用我院提供的胎龄6～8周的Wistar大鼠为研究对象,以豚鼠脑脊髓匀浆加完全弗氏佐剂作为抗原,给予Wistar大鼠四足垫皮内注射,足背辅以注射百日咳原液,建立EAE模型。2、对正常组、免疫后7d组、发病后3d、7d、14d及21d组,分别进行5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)和BrdU/GFAP免疫组织化学双染色,以观察正常大鼠脑内BrdU及BrdU/GFAP表达情况及EAE免疫损伤后BrdU及BrdU/GFAP随时间的变化规律。3、用NGF药物治疗EAE大鼠,观察其促神经干细胞增殖效应和诱导分化效应,用增殖细胞单克隆抗体BrdU及BrdU/GFAP鉴定神经干细胞的自我更新增殖能力及向星形胶质细胞方向分化潜能。结果1、在免疫后12天开始出现肢体瘫痪,双后肢拖动等EAE临床症状。光镜下可见脑组织中有大量炎性细胞浸润,炎性细胞聚集在血管周围呈典型的“袖套”样改变。2、在正常组大鼠,Brdu阳性细胞主要分布在室管膜下区(SVZ)及海马齿状回的颗粒层(SGZ);Brdu阳性细胞数在免疫后呈现先上升后下降的变化趋势,于发病后3d达高峰,21d恢复正常。与EAE组比较,治疗组BrdU阳性细胞表达明显增强,治疗组与EAE组之间在发病后7d、14d和21d均存在显著性差异。3、EAE造模后,BrdU~+/GFAP~+在不同时间点的表达不同,BrdU~+/GFAP~+细胞在免疫后呈现先上升后下降的变化趋势,于发病后3d达高峰,持续一周后缓慢下降,21d仍高于正常。治疗组BrdU~+/GFAP~+细胞数量明显增多,治疗组与EAE组之间在发病后7d、14d和21d均存在显著性差异,治疗组发病后7d与14d相比无显著性差异。结论1、EAE模型建立方法稳定、可靠。2、EAE可以诱导大鼠脑内神经干细胞的增殖及向星形胶质细胞分化。3、NGF治疗能够促进EAE大鼠脑内神经干细胞增殖,并向星形胶质细胞方向进行分化。