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卵黄蛋白原(vitellogenin, Vg)广泛存在于卵生动物中,是卵黄磷蛋白(vitellin,Vn)的前体蛋白,而Vn则是卵黄蛋白(yolk protein, YP)的主要成分。Vg是一种高分子量的含糖、磷、脂的蛋白,其最基本的功能是为胚胎发育提供营养物质和能量,此外Vg还具有运输脂类、参与免疫防御等多方面的功能。本课题组先前已克隆了拟穴青蟹(Scylla paramamosain) Vg(SpVg)的gDNA和cDNA全长序列,并且对SpVg进行了时空表达分析,因此本文在此基础上对SpVg进行了进一步的研究,主要结果如下：1)利用三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) Vn抗体,采用western blot方法确定了雌性拟穴青蟹Vg/Vn蛋白的亚基组成,血淋巴Vg由约80kDa和207kDa两个亚基组成,卵巢Vn由约80kDa、100kDa和107kDa三个亚基组成。并且推测得到拟穴青蟹外源性Vg的剪切模式：约287kDa的SpVg在肝胰腺合成后,被类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-like endoprotease)识别RERR保守基序,剪切得到约80kDa和207kDa大小两个亚基,它们随后被释放入血淋巴并被运输至卵巢,大亚基在卵巢中再一次被某种未知的蛋白酶剪切成约100kDa和107kDa两个小亚基,这样SpVg经过两次蛋白酶剪切最终形成含三个亚基的Vn。2)采用免疫组化和原位杂交法对雌性拟穴青蟹肝胰腺和卵巢中的Vg/Vn进行定位,结果显示卵巢的滤泡细胞和肝胰腺的腺管上皮细胞是Vg合成的场所。Vg蛋白最终被卵母细胞吸收,经过一系列的剪切加工后形成Vn,储存于卵黄颗粒中,为以后的胚胎发育提供营养物质。Vg通常被认为是雌性动物特有的蛋白,而雄性动物通过外界诱导也可产生,但有趣的是我们竟然在正常生理条件下的雄性拟穴青蟹生殖系统中发现Vg类似物(SpVg-like)的存在,并将其与雌蟹中的SpVg进行比较,主要内容如下：1)用分子生物学方法在精巢组织中克隆得到SpVg-like的cDNA全长序列(8316bp),并将其与从雌性青蟹中克隆得到的SpVg的gDNA和cDNA进行比较,发现SpVg-like cDNA与SpVg cDNA序列基本一致,但在5’端保留了SpVg gDNA的前三个内含子,这种现象被称为内含子保留,是一种选择性剪接。2)在雄性拟穴青蟹各组织中对SpVg-like mRNA表达进行了检测,结果只有精巢有该基因的表达。3)利用三疣梭子蟹Vn抗体,采用western blot方法在雄性拟穴青蟹的贮精囊中检测到了一条大小约210kDa的目的条带,我们认为它就是SpVg-like蛋白,并且发现它与雌蟹血淋巴检测到的SpVg蛋白大亚基的大小几乎相同,所以我们推测SpVg-like蛋白的序列可能与SpVg蛋白大亚基一致。4)采用免疫组化和原位杂交法在拟穴青蟹的精巢、贮精囊和纳精囊中分别对SpVg-like蛋白和SpVg-like mRNA进行定位。结果SpVg-like蛋白在这三个组织中的精子/精荚均可检测到,而SpVg-like mRNA却仅在精巢的精子中表达。说明SpVg-like蛋白在精巢的精子中表达合成后,一直储存在精子中,直到受精前都不被消耗利用,推测它可能与精子的最后成熟或受精过程相关。综上所述,本文从蛋白层面上丰富了SpVg的研究,另外还在雄性拟穴青蟹生殖系统中发现了SpVg类似物的存在,而这些都充实了对Vg的研究,并为深入了解Vg在生殖方面的作用奠定了基础。