奶牛乳房炎是奶牛养殖中一种发病率和感染率较高的疾病,其中病原微生物感染是其主要致病原因。湖南省地处中南,湿热气候限制了其奶牛的规模养殖,对于相关奶牛疫病防控的资料相对较少。为探明湖南省规模化奶牛场中乳房炎主要病原菌的种类,本论文基于湖南省畜牧兽医研究所奶牛生产性能测定中心（DHI）提供的数据,从湖南省4个规模化养殖场中采集乳房炎奶样开展病原菌的分离与鉴定,并对主要优势菌进行了耐药性检测;为了使基层单位及时、快速并准确地监控奶牛乳房炎的发生,本论文进一步结合小型动物疫病检测仪的配套使用,针对分离的主要病原菌建立了相应的环介导等温扩增技术（LAMP）检测方法,旨在为湖南省奶牛乳房炎的防控提供科学依据。通过对DHI数据分析,从4个奶牛场共获得77份体细胞超过50万个/m L的奶样,经过病原菌的分离培养、革兰氏染色、PCR扩增及16S r DNA的测序,共鉴定获得37种162株病原菌,其中A、B、C和D奶牛场中分别分离出24、29、48和61株病原菌;测序结果发现,分离的主要病原菌为金黄色葡萄球菌（25.31%,41株）、松鼠葡萄球菌（20.37%,33株）、地衣芽孢杆菌（5.56%,9株）、大肠杆菌（5.56%,9株）和肺炎克雷伯菌（4.32%,7株）;此外,日勾维多细菌源菌、蜡状芽孢杆菌、腐生葡萄球菌、短小芽孢杆菌、棒状杆菌和溶血葡萄球菌也各有4株（2.47%）。分析各养殖场感染情况发现4个奶牛场中均有金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的感染,而松鼠葡萄球菌和肺炎克雷伯菌只在D奶牛场的乳房炎奶样中检出;其他病原菌在各牛场的感染情况存在一定差异。同时,本研究采用药敏纸片法对感染率较高的3种病原菌（包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌）进行了药物敏感性检测,结果显示3种主要病原菌均对阿莫西林有较强耐药性,对庆大霉素和环丙沙星较敏感。针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌所建立的LAMP快速检测方法显示,与普通PCR检测法比,可视化的LAMP技术灵敏性高,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的最低核酸检测量分别是5×10-5ng、5×10-6ng和5×10-7ng,比普通PCR低3-4个数量级;且30 min内通过观察扩增曲线即可判定结果,该方法操作简便,适于临床实践中大批量样品的快速检测。本研究表明,湖南省规模化奶牛场乳房炎奶样中主要病原菌为金黄色葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、地衣芽孢杆菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌;配套使用小型动物疫病检测仪初步建立的LAMP检测法可实现奶牛乳房炎主要病原菌的快速诊断。