荧光假单胞菌毒蛋白的分离纯化与松材线虫的无异培养

来源 :南京林业大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:chener
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本研究对松材线虫携带的致病细菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens GcM5-1A菌株产生的毒素蛋白进行了分离、纯化及对分离后蛋白组分的生物活性进行了测定;同时,对松材线虫的无异培养进行了研究,主要的研究结果如下: 1.荧光假单胞菌GcM5-1A毒素原液经(NH42SO4分级盐析及生物活性测定后得到毒性最强的组分;该组分先后依次经葡萄糖Sephadex G-100凝胶层析柱、DEAESephadex A-50阴离子交换柱及SP Sephadex C-50阳离子柱分离及对分离后各组分生物活性测定,得到其中毒性最强组分的纯化蛋白;对纯化蛋白进行SDS-PAGE电泳,得该纯化蛋白的大致分子量为45000。 2.黑松愈伤组织对无菌松材线虫产卵量的影响的研究结果表明:无论是经冷冻处理失活的黑松愈伤组织还是活黑松愈伤组织,两者都能明显地促进松材线虫的产卵:黑松愈伤组织是否失活对松材线虫产卵量没有显著影响。 3.荧光假单胞菌GcM5-1A菌株对松材线虫产卵量的影响的研究结果表明:用经三氯甲烷处理后的死荧光假单胞菌GcM5-1A与活荧光假单胞菌GcM5-1A都对松材线虫的产卵量有显著的促进作用;荧光假单胞菌GcM5-1A是否死亡对松材线虫的产卵量没有显著影响。 4.研究表明:用死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织培养的无菌松材线虫的产卵量与用活黑松愈伤组织培养的野生松材线虫的产卵量之间没有差异,而用前者培养的无菌松材线虫的产卵量却显著多于单独用死黑松愈伤组织培养的无菌松材线虫的产卵量,说明用死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织比单独用黑松愈伤组织培养无菌松材线虫能促进松材线虫的繁殖。 5.对分别用活黑松愈伤组织、死荧光假单胞菌、活荧光假单胞菌以及死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织四种介质培养的第一代和第二代无菌松材线虫雌雄成虫体长、体直径及体积进行观察测定,结果表明,无论是第一代还是第二代,用死荧光假单胞菌加死愈伤组织培养的无菌松材线虫雌雄成虫的体长、体直径和体积都明显大于用其它三种介质培养的松材线虫雌雄成虫的体长、体直径和体积,说明与其它三种介质相比,死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织能明显促进无菌松材线虫的生长发育。 综上所述,本研究首次对松材线虫携带的致病细菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescents)GcM5-1A菌株产生的毒素蛋白进行分离、纯化及生物活性测定,得到了毒性最强的纯化蛋白;经测定其分子量约为45000。本研究首次报道了用死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织培养无菌松材线虫的新方法;该方法比单独用黑松愈伤组织培养无菌松材线虫在线虫产卵量及生长繁殖方面更好。
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